实验室细胞房支原体污染的清除方法，提供北京实验室上门消毒服务

摘要：支原体污染是细胞培养中的常见问题，会对细胞的生长、代谢、基因表达等方面产生诸多不良影响，导致实验数据不可靠，严重影响科研工作的准确性和可信度。以下是针对实验室细胞房支原体污染的清除方法：

支原体污染是细胞培养中的常见问题，会对细胞的生长、代谢、基因表达等方面产生诸多不良影响，导致实验数据不可靠，严重影响科研工作的准确性和可信度。以下是针对实验室细胞房支原体污染的清除方法：

一、清理与消毒步骤

确认污染范围 ：首先需确认细胞房内同批次细胞、培养基、血清等是否也被污染，可通过观察细胞形态、生长状况以及进行 PCR 检测等方法来确定污染范围。

清理污染物品 ：将细胞房内的所有物品进行清理，对于被污染的细胞，若无重要研究价值或污染严重则建议丢弃；对于有保留价值的细胞，可使用支原体清除培养基进行处理。

清洁细胞房 ：使用 5% 硫酸铜溶液充分擦洗细胞培养箱等设备的内部表面，确保涂覆均匀。也可用 1% 新洁尔灭擦拭整个细胞房的内部表面，包括墙壁、地板、工作台、仪器设备等，确保无死角。

消毒处理 ：采用润联生命科学的过氧化氢干雾消毒系统（比林科汉KV3000 & 欧菲姆KVBOX），该设备可将过氧化氢液体雾化成 ≤1μm 的超纳米干雾颗粒，能够穿透生物安全柜 HEPA 滤网、培养箱管道等传统消毒盲区，杀灭率 ≥99.999%，有效杀灭支原体等微生物，且分解产物仅为水与氧气，无腐蚀性，消毒后无需通风即可恢复实验。还可结合紫外线照射、臭氧消毒等方法进行全方位消毒，根据实验室的实际情况选择合适的消毒方法，确保彻底消除支原体污染。

验证消毒效果 ：消毒完成后，需对细胞房进行验证，确保支原体污染已被彻底消除。可以通过再次进行 PCR 检测、DNA 荧光染色法或培养检测等方法来验证消毒效果。如果验证结果显示仍存在支原体污染，应重新进行清理和消毒处理。

二、预防措施

规范实验操作 ：实验人员应严格遵守无菌操作规范，避免手部接触细胞培养物及相关器具，操作时动作要轻柔、准确，防止产生气溶胶，减少支原体传播风险。不同细胞株的培养瓶、移液管、吸头等物品要严格区分，专人专用，避免交叉污染。每次在生物安全柜内操作的细胞株数量不宜过多，建议每次只操作一种细胞，防止因操作复杂导致的污染风险增加。

加强人员管理 ：实验人员如患有感冒、咳嗽、皮肤感染等疾病，应避免进入细胞培养实验室或参与相关操作，以防将支原体带入实验室。定期对实验人员进行支原体污染危害及预防方法的培训，提高其防控意识和操作技能。

严格物品管理 ：确保细胞培养所用的培养基、血清、试剂等原材料来自正规供应商，且经过严格检验，无支原体污染。对进入细胞培养实验室的物品，如培养皿、吸管等，要经过高压灭菌、紫外线照射、化学消毒剂浸泡等方法进行消毒处理。

定期检测与消毒 ：对细胞培养物进行定期支原体检测，可采用 PCR 检测法、DNA 荧光染色法等方法，以便及时发现潜在污染。同时，定期使用润联生命科学的支原体清除喷雾（诺沃赛德NOVOCIDE）对细胞房进行空间消毒，或采用甲醛熏蒸法消毒无菌室，每季度或半年对细胞房进行全面消毒。