优品生物科普：WB实验选一抗，兔源还是鼠源？

摘要：Western Blot（WB）作为实验室里的“老将”，其结果的清晰度与特异性，很大程度上取决于核心武器——一抗的选择。面对琳琅满目的抗体产品，一个基础却至关重要的问题常被提出：“WB一抗，到底该选兔抗还是鼠抗？”优品生物深知您的困惑，本文将为您清晰解读这两种

Western Blot（WB）作为实验室里的“老将”，其结果的清晰度与特异性，很大程度上取决于核心武器——一抗的选择。面对琳琅满目的抗体产品，一个基础却至关重要的问题常被提出：“WB一抗，到底该选兔抗还是鼠抗？” 优品生物深知您的困惑，本文将为您清晰解读这两种常见一抗来源的差异与选择策略。

一、兔抗 vs 鼠抗：本质差异源于免疫系统

兔抗 (Rabbit Antibodies): 源于兔子免疫系统。兔子体型较大，免疫反应通常更强烈，产生的抗体具有更高的亲和力 (Affinity) 和更广泛的表位识别能力 (Epitope Recognition)。这意味着兔抗更容易与目标蛋白紧密结合，信号更强，背景相对较低。

鼠抗 (Mouse Antibodies): 源于小鼠免疫系统。小鼠是经典的模式动物，其单克隆抗体技术成熟，可提供极高的特异性 (Specificity) 和批次间一致性 (Batch-to-Batch Consistency)。

二、 WB实战：兔抗与鼠抗的表现对比

在WB这个特定战场上，两者的优劣势表现鲜明：

信号强度与灵敏度：

兔抗通常占优：其高亲和力特性使其在检测低丰度蛋白时更具优势，能产生更强的信号，提升实验灵敏度。

鼠抗：亲和力通常低于兔抗，检测痕量蛋白时可能略显吃力。

非特异性结合（背景噪音）：

兔抗潜在风险稍高：更广泛的表位识别能力是一把双刃剑，理论上增加了与样本中非目标蛋白交叉反应的风险，可能导致背景稍高（需通过优化封闭和洗涤条件控制）。

鼠抗（尤其单抗）优势明显：单克隆鼠抗针对单一表位，特异性极高，非特异性结合风险通常更低，背景更干净。

二抗选择与多重检测：

二抗匹配：选择兔抗一抗，需搭配抗兔二抗（如山羊抗兔HRP）；选择鼠抗一抗，则需搭配抗鼠二抗（如山羊抗鼠HRP）。优品生物提供全系列高性价比、高特异性的HRP、AP或荧光标记二抗。

多重WB (Multiplexing)：这是鼠抗的一大优势场景。如需在同一张膜上同时检测多个目标蛋白，选择不同宿主来源的一抗（如一个兔抗 + 一个鼠抗），再搭配对应种属特异性二抗（如抗兔-Alexa Fluor 680 + 抗鼠-Alexa Fluor 800），即可实现互不干扰的双重或多重检测。若都用兔抗，二抗无法区分来源，多重检测无法实现。

物种交叉反应性：

检测哺乳动物样本（人、小鼠、大鼠等）时，需特别注意：如果一抗是用小鼠的同源蛋白免疫兔子制备的（兔抗小鼠XX蛋白），那么它识别小鼠样本中的目标蛋白通常没问题。但如果一抗是用小鼠蛋白免疫小鼠自身制备的（鼠抗小鼠XX蛋白），则可能因小鼠样本中含有大量小鼠IgG而产生强烈的背景干扰（二抗会同时结合内源性小鼠IgG和一抗）。因此，检测小鼠样本时，优先选择兔抗（或山羊、大鼠等其他物种来源）一抗更为稳妥。

三、优品生物建议：如何明智选择？

没有绝对的好坏，只有最适合您实验需求的选择：

优先考虑兔抗的情况：

检测低丰度蛋白，需要更高灵敏度。

目标蛋白的优质鼠抗难以获得或不理想（兔抗产品通常更丰富）。

检测的样本来源于小鼠或大鼠（避免内源性IgG干扰）。

进行常规单靶标检测。

优先考虑鼠抗（尤其单克隆）的情况：

对特异性要求极高，需要最低背景（如磷酸化蛋白检测）。

计划进行多重Western Blot，需要搭配不同宿主的一抗。

需要极佳的批次间一致性（单克隆鼠抗优势显著）。

目标蛋白有经过充分验证的优质单克隆鼠抗可用。