摘要:在真核细胞中,许多前体mRNA (pre-mRNA) 会发生剪接以生成不同的成熟mRNA,进而被翻译成结构和功能不同的蛋白质。色素性视网膜炎(RP) 是一种以光感受器变性和失明为特征的疾病,目前鉴定的RP致病基因已超100种,其中一类便与pre-mRNA的剪接
撰文 | Qi
在真核细胞中,许多前体mRNA (pre-mRNA) 会发生剪接以生成不同的成熟mRNA,进而被翻译成结构和功能不同的蛋白质。色素性视网膜炎(RP) 是一种以光感受器变性和失明为特征的疾病,目前鉴定的RP致病基因已超100种,其中一类便与pre-mRNA的剪接相关,但其确切的调控机制仍然未知。
近日,来自德国法兰克福大学的Ivan Dikic团队在Science杂志上发表了一篇题为Pathogenic proteotoxicity of cryptic splicing is alleviated by ubiquitination and ER-phagy的文章,他们报道了人类细胞系、斑马鱼和小鼠中泛素特异性蛋白酶39(USP39)的缺乏可导致剪接体组装受损和隐蔽5’剪接位点 (cryptic 5' splicing sites, C5'SS)为特征的细胞毒性特征(错误折叠的蛋白聚集、内质网应激等) ,但可通过上调泛素-蛋白酶体系统和内质网自噬来减轻,总之,这项研究结果有助于加深人们对剪接体相关疾病分子机制的理解。
剪接体相关疾病中经常能检测到能破坏U4/U6.U5 tri-snRNP剪接体复合物稳定性的突变,已知泛素特异性蛋白酶39 (USP39) 可参与tri-snRNP的组装,而RP患者样本常检测到USP39缺乏【1-3】。为阐明RP发病是否与USP39缺乏相关,该团队利用CRISPR-Cas9生成usp39缺陷斑马鱼,发现其表型和转录组与人类RP受试者相似,而在靶向USP39的si-RNA处理的HeLa细胞中U4 snRNA、U5 snRNA和tri-snRNP蛋白的相互作用减少。MAJIQ工具【4】分析显示USP39缺陷HeLa细胞、斑马鱼和小鼠中未在人类参考基因组中注释的C5'SS事件增加,伴随外显子序列中移码或提前终止密码子的频率增加,但RNA-seq结果显示异常转录本并未下调,提示无义介导的mRNA衰减 (NMD) 受损。此外,负责在应激条件下维持蛋白质稳态的热休克反应 (HSR) 在USP39缺陷体内外系统中上调,说明蛋白稳态被破坏,且胞内出现不溶性蛋白的聚集。
随后,该团队分析了USP39缺陷细胞的蛋白质组,发现mTOR失活且自噬途径相关蛋白富集。已知BiP与受体FAM134B结合可促进内质网自噬 (ER-phagy) 并抵消ER应激【5】,该团队观察到USP39缺陷细胞中FAM134B与另一种在自噬中起关键作用的蛋白LC3B的共定位增加,提示细胞可能通过ER自噬从而在剪接受损的情况下减轻ER应激。
但胞内的蛋白毒性聚集体如何处理?通过对上述蛋白组结果进行分析发现USP39缺陷细胞中泛素化途径上调,为确定USP39的去泛素化活性是否与细胞内增强的泛素化有关,他们分析了USP39的催化活性,但与USP39相互作用的蛋白在其缺陷细胞中并未被泛素化。已知NRF1和HSF1可以诱导 泛素蛋白酶体系统 (UPS) 基因转录以响应蛋白毒性应激【6】,而在USP39缺陷细胞中,该团队确实观察到HSF1和NRF1的激活,提示UPS系统可减轻错误折叠蛋白聚集引起的细胞毒性,若用MG132蛋白酶体抑制剂处理细胞则能导致胞质聚集物、内质网腔内未折叠蛋白和内质网应激的增加,损害细胞生长。
综上,这项工作表明USP39是剪接保真度的调节因子,其缺陷会激活C5'SS的使用并产生蛋白毒性剪接变体,从而触发胞质蛋白聚集和内质网应激,激活UPR途径并导致细胞死亡,这些发现提供了对剪接体相关疾病发病机制的深入了解,也为未来针对这类疾病(例如RP)的靶向治疗提供了潜在的策略。
science.org/doi/10.1126/science.adi5295
制版人:十一
参考文献
1. Y.-H. Huang, C.-S. Chung, D.-I. Kao, T.-C. Kao, S.-C. Cheng,Mol. Cell. Biol.34, 210–220 (2014).
2. D. E. Agafonov et al.,Science351, 1416–1420 (2016) .
3. A. Buskin et al.,Nat. Commun.9, 4234 (2018).
4. J. Vaquero-Garcia et al.,eLife5, e11752 (2016).
5. S. Chipurupalli et al.,Cell Death Dis.13, 357 (2022).
6. A. Northrop, H. A. Byers, S. K. Radhakrishnan,Mol. Biol. Cell31, 2158–2163 (2020).
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来源:大嘴叨科学