摘要：近年来，癌症免疫治疗领域迎来了一项革命性突破——体内（In Vivo）CAR-T细胞疗法，它通过递送载体将CAR编码基因携带到特定免疫细胞，直接在患者体内将T细胞改造成CAR-T细胞,使其能够精准识别并攻击肿瘤细胞。与传统的体外（Ex Vivo）CAR-T疗法

转自：ACROBiosystems官方

In Vivo CAR-T疗法

技术优势与临床潜力

近年来，癌症免疫治疗领域迎来了一项革命性突破——体内（In Vivo）CAR-T细胞疗法，它通过递送载体将CAR编码基因携带到特定免疫细胞，直接在患者体内将T细胞改造成CAR-T细胞,使其能够精准识别并攻击肿瘤细胞。与传统的体外（Ex Vivo）CAR-T疗法不同，In Vivo CAR技术无需将细胞提取出来进行改造和回输，无需清淋，直接在患者体内实现免疫细胞的重编程，大大简化了治疗流程，为癌症患者带来了更为便捷和高效的治疗选择。

In Vivo CAR的优势

避免化疗预处理：传统疗法需通过化疗清除患者原有淋巴细胞，可能引发严重感染或器官损伤。In Vivo技术通过靶向递送减少对正常细胞的干扰，无需高强度化疗。

降低细胞因子风暴风险：体内重编程的CAR-T细胞活性更可控，临床前数据显示其IL-6释放量较传统疗法降低40%-60%。

适应症扩展：在实体瘤治疗中展现出突破性潜力，如INT2104在临床前研究中显示对HER2阳性乳腺癌的有效性。

2024年全球In Vivo CAR-T领域迎来里程碑式进展。Interius公司的INT2104成为全球首款进入人体临床试验的In Vivo CAR疗法，主要用于治疗B细胞恶性肿瘤。紧随其后，Umoja公司的UB-VV111也于同年获得了临床试验批准。这两项临床试验的获批，不仅标志着In Vivo CAR-T技术在全球范围内的快速发展，也展现了其在癌症治疗中的巨大应用潜力。

递送载体

In Vivo CAR-T的核心引擎

在In Vivo CAR-T疗法中，递送载体的选择至关重要，目前体内CAR-T疗法的递送载体主要分为病毒载体和纳米载体两大类型。脂质纳米颗粒（Lipid Nanoparticles，LNP）作为一种高效的纳米递送载体，因其独特的物理化学性质和生物相容性，成为In Vivo CAR-T疗法中CAR递送的理想选择。基于CAR疗法的脂质纳米颗粒通常由阳离子脂质、胆固醇、PEG脂质、中性脂质四大核心成分构成。脂质结构使其在体内循环过程中能够保护CAR免受体内核酸酶的降解，其纳米级别的尺寸使得它能够轻松穿透生物膜，高效地将包裹的CAR递送至细胞内部，从而实现高效的基因编程。

LNP的靶向性突破

抗体偶联技术

近年来，LNP技术取得了显著进展，尤其是在靶向递送方面。通过在LNP表面连接靶向抗体（也称为抗体偶联LNP, Ab-LNP），可以显著增强其对特定细胞的特异性，从而实现精准治疗。常见的靶向抗体包括CD4抗体、CD8抗体、CD3抗体、CD5抗体、CD7抗体等，这些抗体能够有效地引导LNP精准识别并定位到特定细胞，如T细胞或NK细胞。以Capstan Therapeutics为例，该公司研发的CPTX2309通过靶向CD8抗体，将脂质纳米颗粒与CAR编码mRNA结合，成功实现了T细胞的原位重编程。这种靶向递送策略不仅提升了治疗效果，还有效减少了对非靶细胞的毒性反应，从而提高了疗法的安全性和疗效。

LNP表面抗体密度优化

精准递送的核心挑战

在抗体偶联脂质纳米颗粒（Ab-LNP）的开发过程中，抗体密度的优化是一个至关重要的环节。抗体密度直接决定了LNP的靶向效率、抗原亲和力以及细胞内化速率，进而直接影响治疗效果和安全性。优化抗体密度有以下几个关键作用：

提高靶向精准性：合适的抗体密度确保LNP能够迅速且准确地定位到目标细胞，提高治疗的精准性。

提高递送效率：优化抗体密度有助于增强LNP与目标受体的结合强度，提高递送效率。

加速细胞内化速率：恰当的抗体密度促进LNP被细胞快速摄取，从而加快CAR gene Payload的释放和发挥作用的速度。

因此，开发可靠的分析方法来测量LNP偶联的抗体密度和抗体结合活性至关重要。目前，科研人员通过多种先进的技术手段，如流式细胞术、表面等离子共振技术等，不断优化和完善对LNP表面抗体相关参数的检测和分析。这些技术的应用不仅提高了Ab-LNP开发的效率和精准度，也为其临床转化奠定了坚实的基础。

· 赋能In Vivo CAR-T Ab-LNP开发的蛋白解决方案 ·

在新型疗法迅猛发展的背景下，ACROBiosystems百普赛斯的研发团队致力于将我们的优势产品与前沿技术相结合，为In Vivo CAR-T细胞疗法的开发提供全方位支持。作为专注于医药研发领域的蛋白供应商，我们已开发出超过50种靶点相关蛋白产品，如CD4、CD8、CD7、CD3和CD5等，这些蛋白是Ab-LNP的靶向T细胞的重要靶点。我们的蛋白可精准检测Ab-LNP的抗体密度，产品稳定性强、一致性高，可提供丰富的荧光标记类型和配套的流式细胞术检测的protocol支持，满足各种Ab-LNP抗体密度优化需求，为精准检测提供可靠保障。

此外，我们凭借自主研发的Star Staining新一代定点标记技术平台，成功开发了一系列特定位点荧光标记的CAR靶点相关蛋白产品。这些产品不仅能够保持蛋白的天然空间构象，确保其活性和高灵敏度检测，而且具有优异的均一性，避免了非特异性信号的干扰。全方位蛋白解决方案，助力加速生物疗法开发进程。

产品优势

采用新一代定点标记技术, 保持蛋白天然构象；

活性不受标记影响

稳定的标记度高灵敏度和高特异性，经流式批检验证

高度批间一致性

验证数据

即用型设计，可提供多种浓度的流式细胞术验证数据，即用性强

1e5 of Mouse Anti-CD7 antibody coupled beads (5.5 μm) were stained with different concentration of Alexa Fluor 647-Labeled Human CD7 Protein, His Tag and negative control protein respectively, AF647 signal was used to evaluate the binding activity (QC tested).

结合活性不受标记影响

Immobilized Alexa Fluor 647-Labeled Human CD7 Protein, His Tag at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Anti-CD7 antibody, Mouse IgG1 with a linear range of 0.05-3 ng/mL (Routinely tested). Labeling with fluorescent dyes did not affect their activity.

高稳定性

Alexa Fluor 488-Labeled Human CD7 Protein, His Tag is stable at 25℃ for 48 hours, equivalent to store at -70℃ for 2 years and freezing and thawing 3 times without performance reduction.

高批间一致性

Binding activity of three different lots of Alexa Fluor 488-Labeled Human CD7 Protein, His Tag against Anti-CD7 CAR-293 cells was evaluated by flow cytometry. The result shows very high batch-to-batch consistency.

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参考文献

1.体内CAR-T疗法临床结果首次公布

2.脂质纳米颗粒中各成分的作用

3.Unleashing the Potential: Designing Antibody-Targeted Lipid Nanoparticles for Industrial Applications with CMC Considerations and Clinical Outlook

4.In situ engineering of mRNA-CAR T cells using spleen-targeted ionizable lipid nanoparticles to eliminate cancer cells

来源：新浪财经