摘要：本检测是一种经济高效的一步法程序，用于测定药物或蛋白质对微管蛋白聚合的影响。它是基于Bonne, D.等人（1）最初描述的检测方法的改进版。聚合过程通过荧光增强来跟踪，因为荧光报告分子在聚合过程中被整合到微管中。标准检测使用神经元微管蛋白（货号T240），生成

本检测是一种经济高效的一步法程序，用于测定药物或蛋白质对微管蛋白聚合的影响。它是基于Bonne, D.等人（1）最初描述的检测方法的改进版。聚合过程通过荧光增强来跟踪，因为荧光报告分子在聚合过程中被整合到微管中。标准检测使用神经元微管蛋白（货号T240），生成代表微管形成三个阶段的聚合曲线，即成核、生长和稳态平衡。其他微管蛋白，如HeLa细胞微管蛋白（货号H001），也可以用于此检测。每次检测的体积为50 µL，微管蛋白浓度低（最终浓度为2 mg/ml，每次检测100 µg），这使得它成为研究更昂贵的癌细胞微管蛋白试剂和高通量应用的理想选择。

经典的微管蛋白聚合检测使用340 nm处的吸光度读数来跟踪微管的形成。它基于这样一个事实：微管散射光的程度与微管聚合物的浓度成正比。Cytoskeleton, Inc.提供这种基于吸光度的检测（货号BK006P）。

艾美捷Tubulin聚合检测(荧光法96assays 猪脑微管蛋白)试剂盒（#BK011P）内容：

试剂盒包含足够进行96次50 µL格式检测的材料。包含以下组分：

>99%纯度的微管蛋白（货号T240）

含荧光报告分子的通用微管蛋白缓冲液

微管甘油缓冲液（货号BST05）

GTP溶液（货号BST06）

紫杉醇阳性对照（货号TXD01）

半面积96孔板。黑色，平底

详细的操作手册和广泛的故障排除指南

Tubulin聚合检测(荧光法96assays 猪脑微管蛋白)试剂盒用途包括：

1成本效益高的抗癌化合物高通量筛选。

2基础研究，用于测定化合物对微管蛋白的IC50值和特异性。

3筛选对微管蛋白聚合活性有影响的蛋白质。

4作为药理学本科/研究生课程的教学辅助工具。

所需设备：配备340-360 nm激发滤光片和420-450 nm发射滤光片的温控96孔板荧光光度计

示例结果：

与微管蛋白相互作用的化合物或蛋白质通常会改变聚合的一个或多个特征阶段。例如，图1显示了向标准聚合反应中加入抗有丝分裂药物紫杉醇的效果。3 µM浓度的紫杉醇消除了成核阶段，并增强了生长阶段的最大反应速率（Vmax）。因此，本检测的一个应用是鉴定新型抗有丝分裂药物。图1还显示了加入微管解聚药物长春碱的效果。在3 µM的最终浓度下，长春碱导致Vmax大幅下降和最终聚合物质量减少。

图1：使用基于荧光的微管蛋白聚合检测（BK011P）进行的微管蛋白聚合。微管蛋白单独孵育（对照组），或与紫杉醇或长春碱共同孵育。每种条件均进行双份检测。通过在360 nm处激发和在420 nm处发射来测量聚合。对照组聚合曲线的三个阶段已标记：I. 成核；II. 生长；III. 稳态平衡。

文献参考：

Bonne, D., Heusele, C., Simon, C., and Pantaloni, D. (1985). 4’, 6-Diamidino-2-phenylindole, a fluorescent probe for tubulin and mictrotubules. J. Biol. Chem. 260, 2819-2825.

来源：科学小商城