甘油三酯测定试剂盒，简单灵敏，适用于多种生物样本

摘要：甘油三酯是由3个脂肪酸和甘油组成的三酯，是动物和植物体内脂肪的主要成分。甘油三酯中存在的脂肪酸类型几乎涵盖了所有已知的天然脂肪酸。多种脂肪酶可以释放这些脂肪酸，随后被用于能量产生或其他目的。AkrivisBio的甘油三酯检测试剂盒提供了一种简单、灵敏的甘油三酯

甘油三酯是由3个脂肪酸和甘油组成的三酯，是动物和植物体内脂肪的主要成分。甘油三酯中存在的脂肪酸类型几乎涵盖了所有已知的天然脂肪酸。多种脂肪酶可以释放这些脂肪酸，随后被用于能量产生或其他目的。AkrivisBio的甘油三酯检测试剂盒提供了一种简单、灵敏的甘油三酯测量方法，适用于多种生物样本。甘油三酯含量可以通过比色法（最大吸收波长570纳米）或荧光法（激发/发射波长535/587纳米）进行测定。比色法的检测范围为每孔0-10纳摩尔，荧光法的灵敏度下限为1-5皮摩尔。

艾美捷甘油三酯测定试剂盒：

货号：MA-0110

规格：100孔

样本类型：组织提取液、细胞裂解液、血清、血浆、尿液

适用物种：通用（适用于所有物种）

检测方法：比色法，检测波长570纳米；或荧光法，激发/发射波长=535/587纳米

检测类型：定量

应用：基于微孔板的比色法/荧光法检测，用于测量样本中的甘油三酯水平。比色法检测范围为0-10纳摩尔/孔，荧光法检测范围为1-5皮摩尔/孔。

灵敏度：

运输条件：凝胶冷藏包

甘油三酯测定试剂盒检测组分：

-检测缓冲液：25毫升，货号WMMA-0110-A

-ADHP溶液：200微升，红色，货号MA-0110-B

-脂肪酶：冻干粉，蓝色，货号MA-0110-C

-甘油氧化混合液：冻干粉，绿色，货号MA-0110-D

-甘油三酯标准品：0.3毫升，黄色，货号MA-0110-E

甘油三酯测定检测原理：

1.单酯、二酯和三酯甘油被脂肪酶水解，生成游离脂肪酸和游离甘油。

2.甘油被氧化，生成化学计量的过氧化氢。

3.过氧化氢和我们的ADHP探针作为过氧化物酶的底物，产生强烈的颜色和荧光。

用户自备材料：

-0.1-0.5%无过氧化物的洗涤剂溶液

储存和处理：

将试剂盒储存于-20°C。使用前将所有试剂恢复至室温。打开试剂瓶前请短暂离心，以使可能粘附在盖子上的组分脱落。

-ADHP溶液：DMSO在略低于室温时会冻结。使用前必须恢复至室温。储存于-20°C。

-脂肪酶：用220微升检测缓冲液溶解。分装后储存于-20°C。

-甘油氧化混合液：用220微升检测缓冲液溶解。最好分装后储存于-20°C，以避免反复冻融。

-甘油三酯标准品：在冷冻时可能会沉淀。为了重新溶解，将试剂瓶放入热水（80-100°C）中加热，直至溶液变得浑浊（2-3分钟）。在加热时涡旋混合，这将使其冷却并再次变为澄清溶液。重复加热/冷却一次。标准品现在可以使用。

检测步骤：

1.标准曲线：

-比色法检测：将40微升甘油三酯标准品加入160微升检测缓冲液中。将0、10、20、30、40、50微升分别加入96孔板的多个孔中，用检测缓冲液将孔体积调整至50微升。各孔分别含有0、2、4、6、8、10纳摩尔的甘油三酯。

-荧光法检测：将10微升甘油三酯标准品加入490微升检测缓冲液中。将0、10、20、30、40、50微升分别加入多个孔中，分别得到0、200、400、600、800、1000皮摩尔的甘油三酯。由于荧光法的灵敏度较高，可以通过进一步稀释标准品，使用0-200皮摩尔范围的标准曲线。

2.样本准备：

-使用100微升无过氧化物的洗涤剂溶液裂解10⁶细胞。将10毫克组织在100微升洗涤剂溶液中匀浆。匀浆液/细胞裂解液应像标准品一样经历加热/冷却循环。体液（血清、脑脊液、唾液等）可以直接使用。将每种样本加入至96孔板的孔中，每种样本加入50微升，成对加入，其中一对作为背景对照。如果最终样本读数不在标准曲线范围内，应适当稀释并重新运行。

-有时基质效应会导致背景值较高和标准曲线斜率变浅，这是由于试剂盒中酶的活性发生改变。在这种情况下，最好向成对测试样本中的一个加入2-4纳摩尔的甘油三酯标准品作为内标。两个样本之间的吸光度差异可用于确定未知甘油三酯含量与加入标准品的比例。

3.样本水解：

-向每个标准品和样本孔中加入2微升脂肪酶。背景对照孔不加脂肪酶。让水解反应进行20-30分钟。

4.甘油氧化：

-根据要测量的孔数准备足够的甘油氧化混合液，每个孔需要50微升。

-反应混合液：

-比色法：检测缓冲液46微升，ADHP溶液2微升，甘油氧化混合液2微升。

-荧光法：检测缓冲液47.8微升，ADHP溶液0.2微升，甘油氧化混合液2微升。

-向含有甘油三酯标准品、样本和背景对照的每个孔中加入50微升反应混合液。充分混合。在室温下孵育30-60分钟（60分钟效果稍好），避光。或者，可以在反应进行时用微孔板读数器监测反应进程。能够观察反应动力学通常可以提供所需的见解。

5.测量：

-通过比色法（570纳米吸光度）或荧光法（激发/发射波长535/587纳米）监测反应进程。当标准品的信号不再变化时，反应完成。达到终点的时间应少于60分钟。

6.典型结果：