摘要:简介:楚秋霞,女,河南长葛人,助理研究员,硕士,从事动物繁殖技术研究。*通信作者,王二耀,研究员,博士,从事动物繁殖生物技术研究;吕世杰,副研究员,博士,从事动物分子育种研究。
单位:1.河南省农业科学院畜牧研究所/河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室;2.郑州市兽药饲料质量安全检验中心
简介:楚秋霞,女,河南长葛人,助理研究员,硕士,从事动物繁殖技术研究。*通信作者,王二耀,研究员,博士,从事动物繁殖生物技术研究;吕世杰,副研究员,博士,从事动物分子育种研究。
基金项目:国家肉牛牦牛产业技术体系项目(CARS-37);河南省肉牛产业技术体系项目(HARS-22-13-S);河南省农科院自主创新项目(2024ZC090)。
来源:《安徽农业科学》2025年6期
引文格式:楚秋霞,陈付英,冯亚杰,等.应用大蒜素缓解牛子宫内膜炎损伤的研究[J].安徽农业科学,2025,53(6):85-88.
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牛子宫内膜上皮细胞是病原菌进入子宫的第一道防线,一旦被病原微生物感染会引起子宫内膜炎的发生,导致母牛屡配不孕、体重降低,严重影响母牛的繁殖能力,是临床上急需解决的问题之一。生活中一些药食同源的原料具有显著的抗炎效果,能够避免因服用合成抗炎药而造成的毒副作用,是未来疾病治疗的重要药物来源。
大蒜素具有安全性高、无残留、抗炎、不产生耐药性等优点,对反刍动物具有促生长、增强机体抵抗力、改善机体抗氧化性及抑菌性等功效。大蒜素能够抑制致病菌,如大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌、变形杆菌和链球菌等,大蒜素作为一种活性抗炎成分已被广泛应用。然而,大蒜素对牛子宫内膜炎是否具有抑制作用尚未见报道。
目的
研究大蒜素对牛子宫内膜炎损伤的治疗作用,为大蒜素治疗牛子宫内膜炎的临床用药提供理论依据。
方法
采用脂多糖诱导牛子宫内膜上皮细胞建立炎性细胞模型,探讨大蒜素的抗炎机制。筛选最佳LPS浓度;通过ELISA方法、荧光定量PCR技术和Western blot方法分别检测细胞炎症因子的含量、mRNA相对表达量和蛋白相对表达量。具体引物序列信息见表1。
结果
◆牛子宫内膜细胞形态观察和活力检测
牛子宫内膜细胞未贴壁时生长速度快,细胞呈椭圆形。传代后3h左右贴壁,大多数呈圆形或椭圆形生长。10μg/mL LPS诱导72h,细胞多呈四角形或多边形,细胞质出现颗粒性物质,伸出伪足,与CK(图1A)相比细胞活力有所提高,如图1B所示。100μg/mL LPS诱导72h,细胞质颗粒性物质增多,细胞活力有所下降(图1C)。
注:A.CK;B.10μg/mL LPS诱导72 h;C.100μg/mL LPS诱导72h。
图1 LPS对牛子宫内膜细胞形态的影响
通过细胞活力试验预估大蒜素对牛子宫内膜细胞活性的影响,结果如图2所示。从图2可以看出,与CK相比,不同浓度的LPS对牛子宫内膜细胞都有增殖作用,随着LPS浓度的增加,细胞增殖速度有所下降。1μg/mL LPS能够诱导牛子宫内膜细胞产生炎症反应,其对细胞活力无明显影响。因此,试验选用1 μg/mL的LPS诱导子宫内膜细胞进行后续试验。
图2 LPS对牛子宫内膜细胞活力的影响
◆大蒜素对炎症细胞因子分泌的影响
利用1μg/mL LPS和不同浓度大蒜素诱导牛子宫内膜细胞进行炎症因子分泌试验,结果如图3所示。从图3可以看出,与对照组相比,LPS组TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的含量均有所升高。与LPS组相比,各大蒜素组TNF-α、IL-1β和IL-6和IL-8的含量均有所降低。
图3 大蒜素对炎症因子含量的影响
◆大蒜素对炎症相关基因转录水平的影响
如图4所示,与对照组相比,LPS组NF-κβp65、TLR4和IL-1β mRNA表达量均有所升高;与LPS组相比,大蒜素+LPS组NF-κβp65、TLR4和IL-1β mRNA表达量均有所降低。
图4 大蒜素对LPS诱导牛子宫内膜细胞中关键基因mRNA表达量的影响
◆大蒜素对炎症关键蛋白表达量的影响
如图5所示,与对照组相比,LPS组TLR4、NF-κβp65的蛋白表达量都有不同程度的升高;大蒜素+LPS组TLR4和NF-κβp65的蛋白表达量较LPS组明显降低。以上结果表明添加大蒜素能够降低TLR4、NF-κβp65的蛋白表达水平。
图5 Western blot检测牛子宫内膜细胞炎症因子TLR4和NF-κβp65的蛋白表达量
结论
大蒜素能够抑制TLR4/NF-κβ信号通路,通过调节细胞炎症因子的分泌发挥抗炎活性,对感染的子宫内膜上皮细胞具有损伤保护作用。
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来源:安徽农业科学