如您需观看4月24日直播回放内容，可根据上方二维码直接跳转到回放界面。本次直播包含：国际外泌体最新研究动态 、如何构建"动物模型-外泌体机制-人类疾病"研究闭环、从样本到应用：外泌体标志物研究的“黄金路线图”等内容，下方是一些常见问答。1.探究标志物miRNA，抽血清里和全血里提取的外泌体有什么区别，哪种效果更好呢？对于大多数涉及到Exosome RNA分离的研究，我们推荐使用血浆。血清是血液凝固之后收集的液体，所以其中少了纤维蛋白原，凝血因子，以及多了很多凝血产物。纤维蛋白原可转化为纤维蛋白，具有凝血功能。在因为血清收集后在凝血过程中，血小板受到刺激会产生许多外泌体和其他形式的小泡，因此血清中获得的小泡始终比血浆中多，甚至超过50%的小泡来源于血小板。所以血浆是研究病理生理状态下外泌体更好的介质。因此一般实验选择血浆，但是，在研究与血小板相关的疾病的时候，应优先选择血清。采血过程中，我们应及时离心除去细胞和血小板，一般在30min内完成，避免长时间存放，同时，需要在室温条件下分离血浆（或者血清），所有样品离心时使用的转速和转子类型要保持一致。Q摘要：如您需观看4月24日直播回放内容，可根据上方二维码直接跳转到回放界面。本次直播包含：国际外泌体最新研究动态 、如何构建"动物模型-外泌体机制-人类疾病"研究闭环、从样本到应用：外泌体标志物研究的“黄金路线图”等内容，下方是一些常见问答。
2.采集和分离外泌体的最佳方法是什么？A
最佳方法取决于实验目的、生物样本类型和实验条件。通常，差速离心是最常用的方法，但免疫磁珠分离和超滤法可以提高纯度。具体而言，差速离心适用于大量样本的初步分离，而免疫磁珠分离和超滤法更适用于特异性和高纯度的外泌体分离。
Q3.超离提取外泌体，粒径太大如何优化？A
超速离心法是最常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。本实验室通过超速离心法提取植物外泌体，有的外泌体粒径大小在200nm左右，提取的浓度在正常范围内。一般在样本前处理步骤最后一步经0.22微米滤膜过滤，除去较大的囊泡，再进行超离即可。或者可以选用试剂盒或者尺寸排阻方法提取外泌体。
Q4.如何评估外泌体的纯度和完整性？A
透射电子显微镜可以显示外泌体的形态和尺寸，验证其完整性。纳米粒子跟踪分析可提供外泌体的粒径分布和浓度信息。通过WB或者纳米流式细胞术检测特定外泌体生物标志物，如CD63、CD81和CD9等，可以评估外泌体的纯度。
Q5.中药外泌体是只能鲜药材能提还是炮制过的也能提吗？A
新鲜植物组织（如根、茎、叶）含有活跃的细胞代谢活动，相对来说更容易提取外泌体，外泌体得率也更高。炮制过程（如干燥、炒制、蒸煮）可能破坏细胞结构，导致外泌体降解或释放到环境中，但是炮制后的饮片依然可以成功提取外泌体，我司已经成功的从中药饮片中提取了外泌体。
Q6.高温后，外泌体还会存在，那么外泌体室温保存会有哪些影响呢？A
正常情况下，还是建议将外泌体低温保存，常温下，可能会导致外泌体聚集，形成大颗粒沉淀，影响均一性。长期放置在室温下，外泌体容易滋生细菌或真菌，也可能会导致膜脂质氧化或水解，破坏膜完整性，内容物发生降解。
Q7.冻干外泌体和新鲜提取的外泌体在生物活性研究中，有什么区别呢？A
冻干外泌体可能因冰晶形成导致膜塌陷或破裂，复溶后粒径增大或聚集，标志蛋白部分丢失或变性。在电镜下观察可能会显示囊泡变形、碎片化或聚集。相比来说，新鲜外泌体完整性更高，功能活性更强，酶活性及信号蛋白功能保留完整，脂质双层结构稳定，生物膜功能正常。
来源：金开瑞生物
