摘要：如您需观看5月21日直播回放内容，可在视频号跳转到回放界面查看。以下是本次直播的一些常见问答：

如您需观看5月21日直播回放内容，可在视频号跳转到回放界面查看。以下是本次直播的一些常见问答：

Q

1.EMSA实验中为什么检测不到DNA-蛋白复合物滞留带？

A

1）涡旋或加热破坏了DNA-蛋白复合物的结构；

2） 蛋白加入量较低或者蛋白降解。

Q

2.EMSA实验为什么检测不到信号或检测的信号低？

A

1） 使用的探针未标记；2）加入的标记探针量少，或者探针被降解；3）抗体效价低或者加入的抗体量过少；4）转膜失败；5）使用错误的膜进行转膜；6）曝光时间短；7） 交联不成功；8）实验过程中膜没有一直处于浸润状态。

Q

3.EMSA实验中在探针的选择上，要考虑哪些重要因素？

A

探针的长度应小于60bp，以有利于非结合探针和蛋白-探针复合物的电泳分离。如结合位点已初步被鉴定，则应用短的核酸探针（约为20bp），这样可避免其他位点的干扰。

Q

4.如何缩小探针序列选择范围？

A

可以通过启动子序列分析查找，确定探针设计范围，如果范围太宽泛，可以先将0.5-1kb片段克隆到荧光素酶报告载体验证其启动子活性以及是否受到该转录因子调控；寻找核心启动子可以通过分段截断验证。如果研究的转录因子具有已知的结合序列motif，则可以在该motif位点选择探针。也可以先进行ChIP或DNA pull down找到富集序列之后，再设计分段探针进行验证。

Q

5.探针一定要两端都标记吗？

A

探针两端并非必须都要标记，但最好还是两端都进行标记，要优势如下：

提高灵敏度：两端标记可以增加探针与检测系统之间的相互作用位点，使检测信号更强，更容易被检测到，从而提高实验的灵敏度，能更准确地检测到蛋白质与核酸的结合情况。

减少空间位阻影响：在探针与蛋白质结合的过程中，如果标记只在单端，可能会因为标记物的存在产生空间位阻，影响蛋白质与探针的结合。两端标记可以使标记物分布更均匀，减少这种空间位阻对结合的影响，使实验结果更真实地反映蛋白质与核酸的相互作用。

Q

6.有其他验证实验的服务吗？

A

金开瑞能够提供包括EMSA、双荧光素酶实验、酵母杂交（YIH/Y2H）、ChIP、荧光素酶蛋白互补实验（LCA）、GST pull-down、双分子荧光互补（BIFC）、免疫共沉淀（Co-IP）等在内的十余种前沿互作技术服务，从方案流程设计到技术试验执行，从科研技术服务到成品试剂盒提供金开瑞互作平台满足您的一切需求。

来源：金开瑞生物