摘要：UbiTest试剂盒用于确定靶蛋白是否被多泛素化。这一强大的平台是对研究蛋白质泛素化最常用方法的改进：免疫沉淀和Western blot分析。然而，在免疫印迹步骤中，底物抗体通常会与底物的多泛素化形式产生不同的相互作用。这是由于表位掩盖、亲和力降低或选择性变化

UbiTest试剂盒用于确定靶蛋白是否被多泛素化。这一强大的平台是对研究蛋白质泛素化最常用方法的改进：免疫沉淀和Western blot分析。然而，在免疫印迹步骤中，底物抗体通常会与底物的多泛素化形式产生不同的相互作用。这是由于表位掩盖、亲和力降低或选择性变化。一种更明确的证明蛋白质泛素化的方法是，在免疫印迹分析之前，将免疫沉淀与广谱去泛素化酶（DUB）消化相结合。经过DUB处理后，目标蛋白（POI）的信号增加，这清楚地表明该蛋白即使在未处理的样本中没有明确的反应性，也已被泛素化。为了避免因POI免疫反应性变化而可能产生的问题，UbiTest检测利用TUBEs来捕获多泛素化蛋白。TUBEs（串联泛素结合实体）是经过工程改造的串联泛素结合域，其与四聚泛素的解离常数在纳摩尔范围内。TUBE1已被证明能够结合所有8种连接类型。

艾美捷UbiTest磁性TUBE洗脱试剂盒（#UM-0411M-1000）组成：

试管1 — TUBE 1（高容量磁性珠子）——1 mL悬浮液，建议用于1-2 mg总细胞裂解物的捕获，使用100 µL悬浮液。

缓冲液：PBS，pH 7.2，20%乙醇

储存：请将磁性TUBE1保存在4°C。不要离心、干燥或冷冻珠子。

试管2 — 洗涤缓冲液——2 mL

试管3 — 洗脱缓冲液——1 mL

试管4 — 10X中和缓冲液（使用前加入β-巯基乙醇至最终浓度为10 mM，例如加入5 uL 1 M β-巯基乙醇溶液）——0.5 mL

试管5 — 广谱DUB——25 ug，10 uM

储存：-80°C

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UbiTest磁性TUBE洗脱试剂盒应用：

从细胞和组织提取物中方便地一步捕获多泛素化蛋白

分离多泛素化蛋白用于蛋白质组学研究

确认靶蛋白的多泛素化

真正的多泛素化证明——无需质谱

轻松比较处理样本之间的多泛素化水平

轻松筛选多个目标蛋白

无需底物纯化

来源：科学巅峰汇