摘要：在Western Blot实验中，抗体稀释是决定实验成功与否的核心环节之一。优品生物深知，选择正确的稀释液和优化稀释浓度不仅能显著提升目标条带信号强度，更能有效降低非特异性背景，为您节省宝贵的时间和试剂。本文将为您详细解析WB抗体稀释的最佳策略。
在Western Blot实验中，抗体稀释是决定实验成功与否的核心环节之一。优品生物深知，选择正确的稀释液和优化稀释浓度不仅能显著提升目标条带信号强度，更能有效降低非特异性背景，为您节省宝贵的时间和试剂。本文将为您详细解析WB抗体稀释的最佳策略。
一、抗体稀释液：如何选择？
抗体稀释并非简单的溶解过程，合适的稀释液能维持抗体稳定性，同时减少非特异性结合。优品生物推荐以下常用且高效的稀释方案：
TBST (Tris Buffered Saline with Tween-20)：
配方： 25mM Tris-HCl (pH 7.4-7.6), 150mM NaCl, 0.1% Tween-20。
优点： 最常用、通用性强；Tween-20有助于洗去非特异性结合的抗体，降低背景。
适用范围： 绝大多数一抗和二抗的理想选择，尤其适用于未明确特殊要求的抗体。优品生物系列抗体默认推荐使用TBST进行稀释。
添加封闭剂的TBST：
配方： TBST + 1-5% 脱脂奶粉 或 1-5% BSA (牛血清白蛋白)。
优点： 封闭剂能进一步饱和膜上潜在的的非特异性结合位点，显著降低背景噪音。
适用范围：
高背景实验： 当使用TBST稀释后背景仍然较高时。
特殊抗体： 某些抗体说明书可能明确要求添加封闭剂稀释。
磷酸化蛋白检测： 强烈推荐使用含BSA的TBST稀释一抗。 脱脂奶粉中可能含有磷酸酶，会干扰磷酸化信号的检测，导致假阴性或信号减弱。优品生物磷酸化特异性抗体均建议使用含BSA的稀释液。
优品提示： 使用优品生物高纯度BSA（货号：BSA-001）能有效避免交叉反应，确保磷酸化信号真实可靠。
特殊稀释液：
少数抗体可能需要在特定缓冲液（如含酪蛋白、特定pH值缓冲液）中稀释，请务必参考优品生物提供的详细说明书。
不同封闭剂稀释液效果对比表
稀释液类型操作便利性背景抑制效果适用抗体类型成本TBST基础液★★★★★★★☆普通一抗/二抗$TBST+脱脂奶粉★★★☆☆★★★★普通一抗/二抗$TBST+BSA★★★★☆★★★★★磷酸化抗体/高背景抗体$$专用封闭缓冲液★★☆☆☆★★★★★特殊需求抗体$$$
注：星级越高代表该项性能越好；成本以美元符号数量表示相对高低
二、稀释浓度：如何优化？
“最佳稀释浓度”并非固定值，它取决于抗体本身亲和力、靶蛋白丰度及检测系统灵敏度：
起始参考点：
一抗： 通常范围在 1:100 到 1:5000 之间。优品生物抗体说明书会提供建议起始浓度（如 1:1000），这是重要的参考依据。
二抗 (HRP或荧光标记)： 常用范围在 1:2000 到 1:20000。市售二抗通常活性较高，需较高稀释倍数（如 1:5000 或 1:10000）以避免过度背景。
优化至关重要：
预实验 (梯度稀释)： 强烈建议对新抗体或新实验体系进行预实验。将一抗按梯度稀释（例如：1:500, 1:1000, 1:2000, 1:5000），在相同条件下进行WB，寻找信号强度足够强、背景足够低的“甜点”浓度。
优品优势： 优品生物抗体经过严格质检，批次间稳定性高，一次优化后可长期稳定使用，助您减少重复优化成本。
三、优品生物实用操作技巧
现配现用： 稀释后的抗体建议当天使用，避免反复冻融或长时间存放导致效价下降或降解。若需保存，请分装冻存于-20℃，并避免多次冻融。
封闭液复用： 稀释一抗用的含封闭剂（BSA/奶粉）的TBST溶液，可在4℃短期保存（1-2周），用于稀释二抗或后续实验的封闭步骤，经济高效（注意避免污染）。
充分混匀： 稀释时务必轻柔且充分混匀，确保抗体均匀分散在稀释液中。
遵循说明书： 优品生物每款抗体都提供详细的实验条件建议（包括推荐稀释液和起始稀释比），这是您实验成功的第一指南。
四、优品生物解决方案：让WB实验更简单高效
高品质抗体： 优品生物提供覆盖广泛靶点的高特异性、高亲和力一抗与高灵敏度、低背景二抗（HRP及多种荧光标记），经严格验证，确保优异的WB表现。
优化的配套试剂： 提供即用型WB相关试剂，包括优品高纯度BSA（有效避免交叉反应）、优品TBST浓缩液（开瓶即用，稀释方便）、优品ECL化学发光底物（高信噪比，信号稳定持久）。
专业的技术支持： 优品生物拥有经验丰富的技术团队，随时为您解答WB实验中的疑难问题，提供个性化优化建议。
结论：
选择合适的稀释液（TBST ± BSA/奶粉）并进行严谨的浓度优化，是获得清晰可靠Western Blot结果的核心步骤。优品生物致力于为您提供稳定可靠的抗体产品和专业的技术支持，助您轻松跨越抗体稀释难关，在科研探索中收获清晰、可信的实验结果！
来源：每天多吃饭
