摘要：Hispolon 是从东方药用蘑菇桑黄中分离出的一种有效的抗癌、抗炎、抗氧化和抗糖尿病药物。然而，Hispolon 影响巨噬细胞和淋巴细胞的免疫调节机制仍不清楚。
出版日期：2022年
发表刊物：《Pharmaceutics》
论文作者：Eun Kyeong Lee、Eun Mi Koh、Yu Na Kim、Jeongah Song、Chi Hun Song 、 Kyung Jin Jung
Hispolon 是从东方药用蘑菇桑黄中分离出的一种有效的抗癌、抗炎、抗氧化和抗糖尿病药物。然而，Hispolon 影响巨噬细胞和淋巴细胞的免疫调节机制仍不清楚。
炎症是机体在损伤或感染后消除有害因素、促进组织修复 / 伤口愈合的防御机制的一部分。在正常情况下，炎症过程会迅速结束，但炎症反应的持续和过度刺激与各种急性或慢性炎症疾病密切相关，如感染、过敏反应、关节炎、哮喘、炎症性肠病、同种异体移植排斥反应和移植物抗宿主病（GVHD）。许多癌症源于感染、慢性刺激和炎症部位，这表明肿瘤微环境在肿瘤形成过程中被免疫系统的炎症细胞和信号分子广泛整合，促进了肿瘤细胞的增殖、存活和迁移。
本文研究了 Hispolon 对脂多糖（LPS）处理的 RAW264.7 巨噬细胞或有丝分裂原 / 同种抗原处理的小鼠脾细胞氧化应激、炎症反应和淋巴细胞增殖的免疫调节作用。
实验方法
材料
实验中使用了多种化学试剂和细胞培养基，包括 AAPH、LPS 等，以及 RAW264.7 巨噬细胞和小鼠脾细胞。
动物
实验使用了 6 周龄的雄性 BALB/c 和 DBA 小鼠，所有动物实验均符合韩国毒理学研究所的动物护理和使用委员会的指导原则。
细胞培养
RAW264.7 巨噬细胞和从小鼠脾脏分离的脾细胞在特定的培养基中培养。
细胞活性测定
使用 CCK-8 试剂测定 RAW264.7 细胞的活性。
ROS 水平测定
通过 DCFH-DA 方法测定 Hispolin 对体外和细胞内 ROS 水平的影响。
总硫醇（SH）水平测定
使用 DTNB 试剂测定细胞裂解液中的总 SH 水平。
Griess 试剂测定
测定 RAW264.7 细胞产生的 NO 量。
瞬时转染和荧光素酶报告基因测定
RAW264.7 细胞转染含有 NF-κB 荧光素酶报告基因的质粒，以验证 Hispolin 对 NF-κB 转录活性的影响。
Western blot 分析
通过 Western blot 分析 Hispolin 对 NF-κB 和 JAK1/STAT3 信号通路的影响。
免疫共沉淀
分析 Hispolin 对 NF-κB p65 与磷酸化 IκBα 以及 JAK1 与 STAT3 相互作用的影响。
有丝分裂原活性测定
测定 Hispolin 对 ConA 或 LPS 刺激的小鼠脾细胞增殖的影响。
混合淋巴细胞反应（MLR）
评估 Hispolin 对 DBA 小鼠刺激细胞和 BALB/c 小鼠反应细胞混合培养的淋巴细胞增殖的影响。
细胞因子测定
使用 ELISA 和 CBA 免疫分析测定 RAW264.7 细胞和脾细胞培养上清中的细胞因子水平。
统计分析
采用单因素方差分析（ANOVA）对结果进行统计分析。
实验结果
Hispolon 对 RAW264.7 细胞活性的影响
Hispolin 在 10 µM 以下浓度未显示出细胞毒性。
Hispolon 的体外和细胞内抗氧化活性
Hispolin 能剂量依赖性地降低由 menadione 和 H2O2 产生的超氧阴离子和羟基自由基水平。
Hispolon 抑制 TNF-α 和 IL-6 的产生
Hispolin 显著抑制 LPS 诱导的 RAW264.7 细胞中 TNF-α 和 IL-6 的产生。
Hispolon 抑制 NF-κB 激活
Hispolin 显著降低了 LPS 刺激的 RAW264.7 细胞中 NF-κB p65 的核转移和 IκBα 的磷酸化。
Hispolon 抑制 LPS 诱导的 JAK1/STAT3 信号通路
Hispolin 减少了 LPS 刺激的 RAW264.7 细胞中 JAK1 和 STAT3 的磷酸化水平。
Hispolon 调节有丝分裂原或异种抗原刺激的淋巴细胞增殖
Hispolin 显著抑制 ConA 和 LPS 刺激的小鼠脾细胞增殖。
Hispolon 抑制 ConA 处理脾细胞的细胞因子产生
Hispolin 剂量依赖性地降低 ConA 诱导的脾细胞中 IL-2、IFN-γ、TNF-α 和 IL-6 的产生。
结论
本研究首次揭示了 Hispolin 通过抗氧化、抗炎和抗增殖活性对 LPS 处理的巨噬细胞和有丝分裂原 / 异种抗原处理的小鼠脾细胞的免疫调节效应。Hispolin 通过减少 ROS/RNS 产生、增加总细胞 SH 水平、降低 TNF-α 和 IL-6 产生以及抑制 NF-κB/IκBα 和 JAK1/STAT3 信号通路活性发挥抗氧化和抗炎效应。此外，Hispolin 还通过抑制淋巴细胞增殖、T 细胞反应和 Th1/Th2 相关促炎细胞因子产生，在脾细胞中发挥抗增殖和抗炎效应。这些发现表明，Hispolin 具有强大的免疫调节作用，并可能作为治疗免疫介导炎症性疾病的有效治疗剂。
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来源：qj千济方
