摘要：在生命科学研究领域，深入探究大鼠生理和病理机制时，准确测定大鼠体内谷胱甘肽（GSH）的含量至关重要。大鼠谷胱甘肽（GSH）定量检测试剂盒（ELISA）作为一款专业工具，为科研人员提供了精准检测 GSH 含量的有效手段。
在生命科学研究领域，深入探究大鼠生理和病理机制时，准确测定大鼠体内谷胱甘肽（GSH）的含量至关重要。大鼠谷胱甘肽（GSH）定量检测试剂盒（ELISA）作为一款专业工具，为科研人员提供了精准检测 GSH 含量的有效手段。
基本信息与适用范围
大鼠谷胱甘肽（GSH）定量检测试剂盒（ELISA）主要用于对大鼠血清、血浆、细胞培养上清液以及组织中的谷胱甘肽（GSH）进行定量检测。此试剂盒专为科研设计，不可用于临床诊断。
实验原理：微观层面的精准检测机制
该试剂盒运用酶联免疫分析方法，基于竞争抑制反应原理开展检测工作。首先，将纯化的抗谷胱甘肽（GSH）抗体包被在微孔板上，构建起一个特定的反应平台。同时，对谷胱甘肽（GSH）进行生物素标记。
在检测过程中，固相抗体、生物素标记的谷胱甘肽（GSH）以及非标记抗原（校准品或标本）之间会发生竞争抑制反应。当样本中的非标记抗原量增多时，会抑制抗体与生物素标记的谷胱甘肽（GSH）的结合；反之，结合量则会增加。
反应达到平衡后，依次形成固相抗体 - 生物素化谷胱甘肽（GSH）以及固相抗体 - 生物素化谷胱甘肽（GSH） - 酶标 - 亲合素复合物。加入底物进行显色反应，最后利用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值）。随着谷胱甘肽（GSH）浓度的升高，OD 值逐渐下降，呈现出良好的线性关系。凭借这一原理，该试剂盒具备灵敏度高、特异性强、重复性好以及操作简便快速等优点，能够可靠地检测出大鼠血清中谷胱甘肽（GSH）含量的变化。
使用限制与技术要点
使用限制
为确保实验结果的准确性和可靠性，使用该试剂盒时需遵循以下限制：
仅用于科研，不可用于临床诊断。临床诊断对检测的准确性、可靠性和规范性要求更为严格，该试剂盒无法满足临床应用标准。需在试剂盒标示的有效期内使用。过期试剂盒的性能可能发生改变，会导致检测结果出现偏差，无法保证实验数据的准确性。禁止与其他厂家的试剂盒或组分混用。不同厂家的产品在成分、质量和性能上存在差异，混合使用可能引发不可预测的化学反应，干扰实验结果，影响实验的科学性和可重复性。若样品需要稀释，应使用 PBS（PH7.4）进行稀释。PBS 溶液能够维持实验体系的稳定性，保证实验条件的一致性，从而确保检测结果的准确性。若样本值高于最高标准品浓度值，需将样本适当稀释后重新测定。这样可以确保检测结果处于试剂盒的有效检测范围内，保证数据的准确性和可靠性。检测前需排除待测样本中可能存在的异嗜抗体对检测结果的干扰。异嗜抗体可能会与试剂盒中的抗体发生非特异性结合，从而影响检测结果的准确性，因此在检测前必须采取相应措施排除该干扰因素。本试剂盒的测定结果与通过其他方法得到的检测结果不具有直接可比性。不同的检测方法基于不同的原理和技术，其检测结果可能存在差异，在分析数据时需充分考虑这一点。技术要点
在实际操作过程中，掌握以下技术要点至关重要：
混合蛋白溶液时，要避免产生气泡。气泡可能会改变溶液的分布和反应环境，干扰反应的正常进行，进而影响实验结果的准确性。加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应采用悬臂加样的方式。这样可以有效防止交叉污染，避免不同样本之间的相互干扰，保证实验数据的可靠性和准确性。保证合适的温育时间和充分的洗涤步骤。温育时间不足会导致反应不充分，影响检测结果的准确性；洗涤不充分则会残留未结合的物质，增加非特异性结合，干扰检测结果。因此，合适的温育时间和充分的洗涤步骤是保证实验结果准确性的必要条件。使用自动洗板机时，加入一个 30 秒浸泡的步骤。这有助于提高洗板的效果，使洗板更加彻底，减少残留物质对检测结果的影响，从而提高检测精度。底物溶液正常应为无色液体，若在保存过程中变为蓝色，说明底物溶液已经失效，不可再使用。底物溶液的颜色变化反映了其化学性质的改变，失效的底物溶液无法保证检测结果的准确性，应及时更换。终止液加样顺序应与底物溶液加样顺序一致。加入终止液后，蓝色底物产物会瞬间变为黄色，这是正常的反应现象。遵循正确的加样顺序可以确保反应的准确性和一致性，保证实验结果的可靠性。实验中用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封并在低温干燥的环境下保存。这样可以防止板条受到污染或变质，保持其性能的稳定性，以便下次使用时能够获得准确可靠的实验结果。所有液体组分使用前要充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。充分摇匀液体组分可以保证溶液的均匀性，确保实验条件的一致性；严格按照说明书操作可以保证实验的重复性和准确性，使不同实验人员在相同条件下能够获得相似的实验结果。试剂盒组分与保存
试剂盒组分
该试剂盒包含多种关键组分，它们在检测过程中发挥着各自的重要作用：
校准品：共 6 管，每管 0.5ml，是由抗原配制的 6 个不同浓度的标准品，浓度依次为 400、200、100、50、25、0mmol/L。这些校准品是绘制标准曲线和计算样品浓度的重要参照依据，通过与样品的检测结果进行对比，能够准确计算出样品中谷胱甘肽（GSH）的浓度。包被微孔板：有 96T/48T 两种规格，预包被了固相抗体。微孔板为检测反应提供了固定的场所，固相抗体能够特异性地结合谷胱甘肽（GSH），确保检测的特异性和准确性。HRP 标记抗体：6mL，HRP 标记的检测抗体。该抗体能够与抗原特异性结合，并在后续的反应中催化底物发生显色反应，通过颜色变化来反映样品中谷胱甘肽（GSH）的含量。生物素化抗原：6mL，作为检测抗原参与反应。它与固相抗体和酶标亲合素共同构成了检测体系的核心部分，在竞争抑制反应中发挥重要作用，确保检测结果的准确性和可靠性。底物液 A 和底物液 B：各 6mL，分别为过氧化脲工作液和 TMB 工作液。两者共同作用实现显色反应，是产生颜色变化的关键因素。在酶的催化作用下，底物液发生化学反应，产生颜色变化，从而实现对谷胱甘肽（GSH）含量的检测。终止液：6mL，2mol/L 的稀释液。用于终止显色反应，使反应及时停止，便于准确测定吸光度。在显色反应达到合适的程度后，加入终止液可以迅速终止反应，确保吸光度的测定结果准确反映样品中谷胱甘肽（GSH）的含量。样本稀释液：6mL，PBS 溶液。用于稀释样品，确保样品浓度在试剂盒的检测范围内。当样品中谷胱甘肽（GSH）的浓度过高时，需要使用样本稀释液进行稀释，以保证检测结果的准确性。20× 浓缩洗涤液：30mL，含 0.15% Tween20 的 PBS。用于洗板操作，去除未结合的物质，减少非特异性结合。在检测过程中，洗板操作可以去除未与固相抗体结合的物质，减少背景干扰，提高检测的准确性。说明书：1 份，详细介绍了实验原理、操作步骤、注意事项等内容。为科研人员提供了全面的使用指导，帮助他们正确操作试剂盒，获得准确可靠的实验结果。自封袋：1 个，用于保存剩余板条，保持板条的干燥和清洁。在实验过程中，若有剩余的板条，可以放入自封袋中密封保存，防止其受到污染或变质，以便下次使用。不干胶：2 片，方便实验过程中的标记和记录。科研人员可以使用不干胶对实验样品、试剂等进行标记，便于实验操作和结果记录。保存条件
未开封的试剂盒应保存在 2 - 8℃的环境中，这样可以保证试剂盒的稳定性和有效性。一旦试剂盒过期，其性能可能会发生改变，因此严禁使用过期试剂盒。
其他必备用品与生物安全
其他必备用品
进行实验除了试剂盒本身，还需要准备以下用品：
酶标仪（450nm）：用于精确测量吸光度，通过测定吸光度值来获取实验数据，进而计算出样品中谷胱甘肽（GSH）的浓度。酶标仪能够准确测量底物显色反应后的吸光度，为实验结果的分析提供重要的数据支持。精密移液器及一次性吸头：确保加样的准确性和精度，避免加样误差对实验结果产生影响。精密移液器可以精确控制加样量，一次性吸头可以防止交叉污染，保证实验数据的可靠性。蒸馏水：用于稀释试剂等操作，保证实验用水的纯净度，防止杂质干扰实验。蒸馏水的纯净度高，不会引入额外的杂质，能够保证实验体系的稳定性和实验结果的准确性。洗瓶或者自动洗板机：用于洗板操作，保证实验的清洁度，去除未结合的物质，减少非特异性结合。洗板操作可以有效去除未与固相抗体结合的物质，降低背景信号，提高检测的灵敏度和准确性。37℃水浴锅或恒温箱：为反应提供适宜的温度环境，确保酶促反应和其他化学反应能够在最佳条件下进行。37℃是许多生物化学反应的适宜温度，能够保证酶的活性和反应的顺利进行，从而获得准确可靠的实验结果。500ml 量筒：用于量取液体，方便实验过程中各种试剂的配制和使用。量筒可以准确量取一定体积的液体，为实验试剂的配制提供便利，保证实验操作的准确性。生物安全
在实验过程中，生物安全至关重要，必须严格遵守相关规定：
整个检测过程必须符合实验室管理规范，严格防止交叉污染。所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置，避免对实验室环境和人员造成潜在危害。这是保障实验人员安全和实验室环境安全的重要措施，能够防止病原体的传播和扩散。试剂盒的液体组分中含有 proclin - 300 防腐剂，可能会引起皮肤过敏反应。操作过程中应避免吸入烟雾与皮肤接触，必要时需佩戴防护手套和口罩等防护用品。这是为了保护实验人员的身体健康，避免因接触有害物质而引发过敏或其他健康问题。底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，操作时要格外小心，避免吸入烟雾，防止对身体造成伤害。在使用底物液时，必须严格按照操作规程进行，采取必要的防护措施，确保实验人员的安全。实验过程中应始终戴上防护手套，实验完成后要彻底洗手。这是养成良好实验习惯的重要内容，能够有效防止有害物质对人体的伤害，保障实验人员的身体健康。样品的采集和储存
样本类型和采集
不同类型的样品，其采集方法各有特点：
细胞培养上清：在 4000rpm 条件下离心 20min，去除细胞颗粒和聚合物，将上清液保存在 20℃以下，同时要避免反复冻融。反复冻融可能会导致样品中的成分发生变化，影响检测结果的准确性，因此要尽量保持样品的稳定性。血清：使用不含热原和内毒素的试管进行采集，操作过程中避免任何细胞刺激。在 4000rpm 条件下离心 20min，小心地分离出血清，保存在 - 20℃以下，避免反复冻融。血清的采集过程需要严格控制条件，防止外界因素对血清成分的影响，确保检测结果的可靠性。血浆：采用肝素、EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，在 4000rpm 条件下离心 20 分钟取上清，将血浆保存在 - 20℃以下，避免反复冻融。血浆的采集需要选择合适的抗凝剂，以防止血液凝固，同时要注意保存条件，保证血浆的稳定性。组织：用预冷的 PBS (0.01M, pH = 7.4) 冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1 : 9 的重量体积比，可根据实验需要调整，并建议在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清检测。组织样品的采集和处理过程较为复杂，需要注意每个环节的操作，以保证样品中谷胱甘肽（GSH）的含量不受影响，获得准确的检测结果。样本保存和稳定性
样本在 2 - 8℃条件下，可以储存 72h，或者在 - 20℃储存 6 个月。若样本收集后不是一次检测完，应按一次用量分装冻存，避免反复冻融。使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻，以保证样品的质量和检测结果的准确性。正确的样本保存和处理方法可以有效维持样品中谷胱甘肽（GSH）的稳定性，减少实验误差，提高实验结果的可靠性。
检验方法操作程序
将各种试剂移至室温平衡两小时，取浓缩洗涤液，根据当批检测数量，用蒸馏水按 1：20 稀释，混匀后备用。这一步骤可以使试剂达到适宜的温度和浓度，保证实验的准确性。从密封袋中取出预包被板，设一个空白对照孔，不加任何液体；每个校准品设 2 孔，每孔加入对应校准品 50μl；其余每个检测孔直接加待测血清或质控品 50μl。设置空白对照孔和校准品孔是为了建立标准曲线和进行实验结果的对比分析，确保检测结果的准确性和可靠性。除空白孔外，所有孔加入生物素化抗原 50μl，混匀，贴上封板膜，置 37℃温育 60 分钟。温育过程可以使抗原与抗体充分结合，发生竞争抑制反应，为后续的检测步骤奠定基础。洗板：手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置 10 秒甩干，重复 3 次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤 3 次程序洗板后拍干。洗板操作可以去除未结合的物质，减少背景干扰，提高检测的准确性。每孔加入酶标亲合素 50μl（空白对照孔除外），混匀，贴上封板膜，置 37℃温育 30 分钟。这一步骤可以进一步增强检测信号，提高检测的灵敏度。再次洗板，操作同步骤 4。再次洗板可以进一步去除未结合的物质，确保检测结果的准确性。每孔加显色剂 A 50μl，显色剂 B 50μl，振荡混匀后，置 37℃避光显色 15 分钟，每孔加终止液 50μl。用酶标仪读数，取波长 450nm，先用空白对照孔调零点，然后测定各孔光密度值（OD 值）。显色反应和吸光度的测定是整个检测过程的关键步骤，通过颜色变化和吸光度的测量来确定样品中谷胱甘肽（GSH）的含量。结果计算
检测完成后，以标准品浓度做为纵坐标，对应的吸光度（OD 值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数 Logistic 曲线拟合（4 - pl），创建标准曲线方程。通过样本的吸光度（OD 值），利用方程计算样品的浓度值。若样品被稀释，通过上述方法测得的浓度值要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。这一结果计算过程基于科学的数学模型和实验数据，能够准确计算出样品中谷胱甘肽（GSH）的含量。
试剂盒性能指标
物理性能：液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；所有组分应无包装破损，各组分装量不少于组分表中要求，确保试剂盒的质量和完整性。剂量反应曲线线性：用四参数 Logistic 曲线拟合（4 - pl），剂量 - 反应曲线相关系数（r）的绝对值应不低于 0.9900，表明曲线拟合度高，说明试剂盒在检测范围内具有良好的线性关系，能准确反映谷胱甘肽（GSH）浓度与吸光度之间的关系。精密度：批内精密度要求三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估，批内变异系数 CV% 小于 15%；批间精密度要求三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估，批间变异系数 CV% 小于 15%，这表明试剂盒无论是在同一批次内还是不同批次间都具有良好的精密度，能够稳定地检测出样品中的谷胱甘肽（GSH）含量。灵敏度：最低检出限应不高于 1.0mmol/L，体现了试剂盒对低浓度样品的检测能力，能够检测到极低浓度的谷胱甘肽（GSH），满足科研对高灵敏度检测的需求。回收率：三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次在同一个板块内回收率评估，回收率在 85% - 115% 之间，表明试剂盒的检测结果较为准确，能够真实地反映样品中谷胱甘肽（GSH）的实际含量。稳定性：在 2℃ - 8℃保存，有效期为 6 个月，保证了试剂盒在一定时间内的可靠性，科研人员可以在有效期内放心使用，无需频繁更换试剂盒。检测范围：25 mmol/L – 400 mmol/L，能够满足不同实验对大鼠谷胱甘肽（GSH）浓度检测的需求，涵盖了常见的谷胱甘肽（GSH）浓度范围，为科研工作提供了更广泛的适用性。
大鼠谷胱甘肽（GSH）定量检测试剂盒（ELISA）凭借其科学的检测原理、严谨的操作要求以及出色的性能指标，为科研工作提供了有力的支持。科研人员在使用过程中严格遵循说明书的要求，定能获得准确可靠的实验数据，助力相关科研工作的顺利开展。 来源：开心如意1
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