药物分析归纳-知识点

摘要:为比旋度;D为钠光谱的D线;l为测定管的长度,dm;α为测得的旋光度;d为液体的相对密度。

药物分析归纳

作者:张倩炎(福医大药学3班)

第一章 绪论及药典概况

1、5P标准

GLP——《药物非临床研究质量管理标准》 GCP——《药物临床试验质量管理标准》

GMP——《药品生产质量管理规范》 GSP——《药品经营质量管理规范》

GAP——《中药材生产质量管理规范》

2、ChP组成

药品=中药+化学药品+生物制品 药典=凡例+索引+正文+附录

3、溶解度等级(溶质1g在溶剂中的溶解度)

1~10ml10~30ml30~100ml100~1000ml1000~10000ml>10000ml极易溶易溶溶解略溶微溶极微溶不溶

4、贮藏条件

遮光:容器不透光 密闭:容器密闭,防止尘土进入

密封:容器密封防止风化、吸潮、挥发 熔封:防止空气和水分进入

阴凉处:不超过20℃ 凉暗处:避光并不超过20℃

冷出:2~10℃ 常温:10~30℃

5、温度

冷却至室温约0℃2~10℃10~30℃40~50℃70~80℃98~100℃放冷冰浴冷水室温温水热水水浴温度

6、精确度

精密称定:重量准确至千分之一 称定:重量准确至百分之一

精密量取:符合移液管的精度要求 量取:符合量筒的量取要求

“约”若干:不得超过规定量的10%

7、比旋度的计算 ☆☆☆

(见P33)

[α]为比旋度;D为钠光谱的D线;l为测定管的长度,dm;α为测得的旋光度;d为液体的相对密度。

第二章 药物的鉴别试验

1、性状鉴定

性状:外观、溶解度、物理常数(熔点、比旋度、吸光度)

2、一般鉴别试验

有机氟化物:氧瓶燃烧法,加茜素氟蓝试液,显蓝紫色。

水杨酸盐:加三氯化铁试液,在中性时呈红色,弱酸性时呈紫色。

酒石酸盐:加氨制硝酸银试液,水浴加热,试管壁成银镜。

芳香第一胺:加稀盐酸和碱性β-萘酚试液,生成由橙黄至猩红色沉淀。

托烷生物碱类:加发烟硝酸,水浴蒸干得黄色残渣,放冷加乙醇和氢氧化钠,显深紫色。

金属盐:焰色反应,钠黄钾紫钙砖红。

铵盐:加过量氢氧化钠,加热分解产生氨气,遇润水的红色石蕊试纸变蓝。

氯化物:滴加硝酸银试液,生成白色沉淀,加氨试液即溶解,再加稀硝酸酸化,沉淀又生成。

硫酸盐:加氯化钡试液,生成白色沉淀。

硝酸盐:加等量的硫酸混合,冷却后加硫酸亚铁试液,溶液分层,界面层显棕色。

3、化学鉴别法

呈色反应、沉淀反应、荧光反应、气体生成反应、试剂褪色鉴别、测定生成物的熔点等等。

4、光谱鉴别法

紫外光谱:采用两种浓度的供试液分别测定其最大吸收波长。

红外光谱:适用于组分单一,结构明确的原料药,ChP采用标准图谱对照法,USP采用对照品法。

原子吸收光谱:适用于金属元素。

核磁共振:用于各种分子物理和化学结构的研究。

质谱:广泛应用于药物的定性鉴别和定量测定。

5、色谱鉴别法

薄层色谱TLC鉴别法、高效液相色谱和气相色谱HPLC-MC鉴别法。

6、其他鉴别法

显微鉴别、生物学法、指纹图谱法。

第三章 药物的杂质检查

1、杂质的来源

生产过程:原料或辅料不纯、反应中间体、副产物;

贮藏过程:在外界条件影响下发生水解、氧化、分解、异构、聚合、潮解、发霉等。

2、杂质的分类

一般杂质:自然界分布广泛,在药物生产贮藏过程中易引入的杂质。

特殊杂质:特定药物生产贮藏过程中引入的杂质,也称有关物质。

杂质限量L的计算 ☆☆☆

(见P100)

C为杂质标准液的浓度;V为体积;S为供试品杂质最大允许量。

3、杂质的检查方法

化学方法:显色法、沉淀法、生成气体法、滴定法。

色谱方法:薄层色谱法(杂质对照品法、供试液自身稀释对照法、两者并用、对照药物法)

高效液相色谱法(外标法或对照品法、自身对照法、面积归一化法)

气相色谱法(标准溶液加入法)、毛细管电泳法

光谱方法:紫外分光光度法、红外分光光度法

其他方法:热分析法、酸碱度检查法、物理性状检查法

4、一般杂质的检查

氯化物:在酸性条件下与硝酸银反应,生成白色沉淀。

(注:加硝酸可避免弱酸银盐沉淀的干扰;供试品液如带颜色,可采用内消色法解决。)

硫酸盐:在酸性条件下与氯化钡反应,生成白色沉淀。

铁盐:在酸性溶液中与硫氰酸盐作用生成红色可溶性配合物。

(注:加过硫酸铵的目的是使Fe2+转换成Fe3+,酸性条件下反应可以防止Fe3+的水解。)

重金属盐:硫代乙酰胺在酸性条件下水解产生硫化氢,与重金属离子生成黄色到棕黑色的混悬液。或者在碱性溶液中以硫化钠为显色剂,与铅溶液生成硫化铅沉淀(如磺胺类、巴比妥类药物)。

(注:该比色法用到3支比色管,分别为对照管、供试管、监控管。)

砷盐:采用古蔡法或二乙基二硫代氨基甲酸银法检查。金属锌与酸作用生成氢气,与药物中的砷离子生成易挥发的砷化氢,遇溴化汞试纸,产生黄色至棕色的深斑。后者的方法可产生红色胶态银。

a.加入Zn的作用是产生H2; b.SnCl2与KI的作用是将As5+还原为As3+,I-与Zn2+的配位作用,还可抑制锑化氢的生成; c.醋酸铅棉花的作用是吸收H2S气体,起到过滤的作用。

(注:Sb

5、干燥湿重测定法

作用:主要检查水分及其他挥发性物质。

方法:常压恒温干燥法、减压干燥法与恒温减压干燥法、干燥剂干燥法。

6、水分测定法

方法:费休氏法(原理:碘氧化二氧化硫时消耗水)、甲苯法。

7、炽灼残渣检查法

作用:检测有机药物经碳化后无机盐和金属氧化物。

8、易碳化物检查法

方法:目视比色法。(加入硫酸使之呈色。)

9、残留溶剂测定法

按有机溶剂毒性的程度分为四类:

第一类(避免使用):苯、CCl4等 第二类(限制使用):CHCl3、环己烷等

第三类(控制使用):乙醇、乙醚、乙酸乙酯等 第四类(无限制):三氯乙酸、石油醚等

方法:GC法。(毛细管柱顶空进样等温法/程序升温法、溶液直接进样法)

10、溶液澄清度检查法

方法:比浊法。

*扩展 酸碱滴定法、沉淀滴定法、吸附法

滴定方法被滴定样品滴定液介质/条件指示剂显色直接碘量法维生素C、二巯丙醇碘液水/不限淀粉或碘无色→蓝色剩余碘量法葡萄糖、咖啡因碘、硫代硫酸钠水/酸性淀粉(近终)蓝色→无色铈量法硫酸亚铁片硫酸铈水/酸性邻二氮菲深红→淡蓝亚硝酸钠法芳伯胺类亚硝酸钠水/酸性永停或KI-淀粉—非水碱量法弱碱高氯酸/冰醋酸—结晶紫蓝色/蓝绿色非水酸量法弱酸甲醇钠乙二胺或DMF溴麝香草酚蓝—铬酸钾指示剂法氯化物或溴化物硝酸银水/中性铬酸钾砖红色沉淀银量法Ag+离子硫氰胺水/酸性硫酸铁铵红色吸附剂指示法卤素硝酸银水/酸性荧光黄-Cl-、曙红-Br-

第四章 药物的含量测定方法与验证

1、前提

方法要求:操作简便、结果准确、重现性好。

验证内容:准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、耐用性等。

2、定量分析法

分类:容量分析法(滴定法)、光谱分析法、色谱分析法。

1)容量分析法

特点:简便易行、耐用性高、结果准确、专属性差。

分类:直接滴定法、间接滴定法(生成物滴定法和剩余量滴定法)。

滴定度的计算 ☆☆☆

(见P145)

T为滴定度,mg/ml;m为滴定液的摩尔浓度;a/b为被测药物/滴定剂的摩尔数;M为被测药物的摩尔质量。

含量的计算 ☆☆☆

(见P146)

V为滴定体积;T为滴定度;F为校正因子;W为供试品的称取量。

2)光谱分析法

朗伯比尔定律A=Ecl (E为百分吸收系数,即每100ml待测药物的吸光度值,c的单位g/100ml)

测定方法:对照品比较法、吸收系数法、分光光度法、比色法。

标示量的计算 ☆☆☆

(见P149)

Cx为供试品溶液的浓度;D为稀释体积;W为平均片重/装量;W为供试品取样量;B为标示量。

3)色谱分析法

测定法:外标法(标准曲线法)、内标法(标准加入法)。

系统适用性实验指标:理论塔板数、分离度、重复性、拖尾因子。

气相色谱测定:外标法、内标法、标准溶液加入法。

3、样品的前处理

酸水解法:用于水难溶的含金属有机药物。

碱水解法:用于含卤素的有机药物。

还原法:用于含碘的有机药物。

凯氏定氮法:将含N药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热,药物结构被氧化分解成CO2和H2O,有机N变为无机氨,并于过量的硫酸结合,经氢氧化钠碱化后释放出NH3,经硼酸溶液吸收后,用酸碱滴定。

第五章 略

第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析

1、性质

用途:抑制前列腺素合成,抗炎抗风湿、止痛退热和抗凝血等作用。

结构特征:苯环、游离羧基。

典型药物:阿司匹林、双水杨酯、甲芬那酸、布洛芬、萘普生、吲哚美辛、吡罗昔康、扑热息痛。

理化性质:酸性(羧基,含氢键>吸电子>给电子)、水解性(酯键、酰胺键)、紫外/红外特性。

2、鉴别实验

1)三氯化铁反应

水杨酸反应:水杨酸加三氯化铁试液,生成紫堇色配位化合物。

酚羟基反应:对乙酰氨基酚的水溶液加三氯化铁试液,显蓝紫色。

2)缩合反应

酮洛芬(二苯甲酮):酸性条件下与二硝基苯肼缩合,生成橙色偶氮化合物。

3)重氮化-偶合反应

芳伯氨基:在稀盐酸加热条件下,与亚硝酸钠试液反应,再与碱性β-萘酚偶合生成红色偶氮化合物。

4)氧化反应

甲芬那酸:溶于硫酸后,与重铬酸钾反应显深蓝色,随即变为棕绿色。

吲哚美辛:在硫酸存在下,与重铬酸钾共热,应显紫色;在盐酸中与亚硝酸钠反应显绿色,渐变黄色。

5)水解反应

阿司匹林与Na2CO3试液加热水解后,加过量稀硫酸酸化,生成白色沉淀,并产生醋酸臭气。

6)光谱法(略)、7)色谱法(略)。

3、特殊杂质及检查

1)阿司匹林中游离水杨酸的检查

检测方法:稀硫酸铁铵溶液显色反应。

注:药典采用1%冰醋酸溶液制备供试品溶液,以防阿司匹林水解,同时采用HPLC检查,C18作填充剂。

有关物质:除游离水杨酸外的合成原料(苯酚)及其他合成副产物,如醋酸苯酯、水杨酸苯酯、水杨酸苷、水杨酰水杨酸、乙酰水杨酸苯酯等。

注:除水杨酸峰外,其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积。

4、含量测定

a. 直接滴定法:药物溶于中性乙醇,以酚酞为指示剂,用NaOH滴定液直接滴定。

b. 剩余量滴定法:用定量过量的NaOH滴定液溶解后,用盐酸滴定液回滴定剩余的NaOH滴定液。

c. 水解后剩余量滴定法:加入定量过量的NaOH,加热使酯键水解后,再用硫酸回滴剩余的NaOH滴定。

d. 两步滴定法:第一步中和制剂中酸性水解产物及稳定剂,以消除干扰;第二步为水解后剩余量滴定。

(注:阿司匹林原料药采用酸碱滴定法,而阿司匹林片剂采用两步滴定法。)

e. 非水溶液滴定法:吡罗昔康具有吡啶环,显碱性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定。

第七章 苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析

1、性质

用途:收缩血管、升血压、散瞳、舒张支气管、迟缓胃肠肌、加速心率、加强心肌收缩等作用。

结构:邻苯二酚、苯乙胺(3个取代基团)。

典型药物:肾上腺素、异丙R、重酒石酸去甲R、盐酸去氧R、盐酸多巴胺、盐酸甲氧明、麻黄碱等。

理化性质:酚羟基特性、弱碱性(NH2)、旋光性、紫外吸收特性。

2、鉴别试验

a.三氯化铁反应:酚羟基与Fe3+配位显绿色;在碱性条件为紫红色。

b.甲醛-硫酸反应:肾上腺素显红色,异丙显暗紫色,重酒石酸显淡红色。

c.还原反应:略。

d.氨基醇的双缩脲反应:(鉴别盐酸麻黄碱)加CuSO4与NaOH即显蓝紫色;加乙醚后分层,乙醚层显紫红色,水层显蓝色。

e.脂肪伯胺的rimini试验:略。

3、特殊杂质与检查

项目:酮体杂质(紫外分光法)、光学纯度ee(色谱法和电泳法)、有关物质(TLC——盐酸去氧肾素;纸色谱——盐酸苯乙酸胍;HPLC——其他药物)。

4、含量测定

1)非水溶液滴定法

对象:有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐及金属盐类药物。

非水溶剂种类:酸性R如冰醋酸;碱性R如二甲基甲酰胺;两性R如甲醇;惰性R如甲苯、三氯甲烷。

基本原理:强酸置换出与弱碱结合的弱酸,即BH+A- + HClO4 → BH+ClO4- + HA。

(注:有机弱碱的盐均用高氯酸滴定。)

(注:加入定量的醋酸汞-冰醋酸溶液的目的是消除氢卤酸对滴定的干扰。)

终点指示:常用电位法和指示剂法。指示剂为结晶紫,酸式色为黄色,碱式色为紫色。

2)溴量法

对象:盐酸去氧肾素、重酒石酸间羟胺原料药《药典ChP2010》

原理:苯酚结构在酸性条件下与溴定量发生反应,再以碘量法滴定剩余的溴。

3)亚硝酸钠法

方法:芳伯氨基在酸性溶液中与亚硝酸钠定量发生重氮化反应,用永停法指示终点。

4)紫外分光法与比色法(略)

5)高效液相色谱法(略)

第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药的分析

1、性质

用途:局部可逆性地阻断神经冲动发生与传导。

结构:亲脂性芳香环、中间连接功能基(酯键-对氨基R;酰胺键-酰苯胺R)、亲水性胺基。

典型药物:对氨基类(苯佐卡因、普鲁卡因、丁卡因)、酰苯胺类(利多卡因、布比卡因、罗哌卡因)。

理化性质:芳伯氨基特性、水解特性(酯键)、弱碱性(叔胺氮)、与重金属反应特性、吸收光谱特性。

2、鉴别试验

1)重氮化-偶合反应

原理:芳伯氨基在酸性溶液中与亚硝酸钠反应,加入减小β-萘酚溶液显猩红色沉淀。芳仲胺在酸性溶液中与亚硝酸钠反应,生成乳白色沉淀。

2)与金属离子反应

a.鉴别盐酸利多卡因:在Na2CO3试液中与CuSO4反应生成蓝紫色配位化合物。再溶入CHCl3中显黄色。

b.鉴别盐酸普鲁卡因胺:被浓H2O2氧化成羟肟酸,再与FeCl3反应显紫红色,随即变为棕黑色。

3)水解产物反应

a.鉴别苯佐卡因:加NaOH试液煮沸,再加入碘加热,生成黄色沉淀,并产生碘仿的臭气。

b.鉴别盐酸普鲁卡因:加NaOH溶液即生成白色沉淀,加热变为油状物,继续加热,产生的蒸汽能使红色石蕊试纸变蓝,热至油状物消失后,加盐酸即析出白色沉淀。

3、特殊杂质与检查

项目:盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查(HPLC,C18为填充剂,反向);

盐酸普鲁卡因中有关物质和光解产物的检查(LC/MS联用);

盐酸利多卡因中2,6-二甲基苯胺的检查(HPLC);

盐酸罗哌卡因的光学纯度检查(毛细管电泳)。

4、含量测定

1)亚硝酸钠滴定法

原理:重氮化反应,用永停法指示终点。

注:在不同无机酸中,重氮化反应速度不同,HBr>HCl>HNO3、H2SO4。

注:重氮化反应的速度与温度成正比,但是生成的重氮盐又随温度升高而分解。

2)非水溶液滴定法

方法:将供试品溶于冰醋酸-醋酐溶液中,用高氯酸滴定至终点;以电位法指示滴定终点。

注:加入醋酐的目的是增强布比卡因的碱性,使滴定突跃明显。

3)紫外分光光度法(外标一点法)

4)高效液相色谱法(略)

第九章 二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析

1、性质

用途:钙通道阻滞药,用于缺血性心血管疾病、高血压、脑血管疾病的治疗。

结构:苯基、1,4-二氢吡啶母核。

典型药物:硝苯地平、尼莫地平、氨氯地平、尼索地平、非洛地平等。

理化性质:还原性(吡啶环)、氧化性(硝基)、解离性、稳定性(光化作用)、旋光性、光谱特性。

2、鉴别试验

a.亚铁盐反应:苯环硝基具有氧化性,可与Fe(OH)2发生氧化反应,生成红棕色沉淀。

b.NaOH试液反应:药物在丙酮溶液中与NaOH试液反应,显橙红色。

c.沉淀反应:二氢吡啶可与重金属盐类形成沉淀。(如尼莫地平与HgCl生成白色沉淀)

d.重氮化-偶合反应:苯环硝基在酸性条件下被锌粉还原为芳伯氨基,可鉴别。

e.紫外分光法、红外分光法、色谱法。(略)

3、有关物质的检查

方法:HPLC法。(避光操作)

4、含量测定

a.铈量法:在强酸条件下进行滴定,Ce4+自身可作指示剂。(4价为黄色,3价为无色)

b.紫外分光法、高效液相色谱法。(略)

第十章 巴比妥及苯二氮杂卓类药物的分析

第一节 苯巴比妥类药物的分析

1、性质

用途:广泛用于镇静催眠。

结构:环状丙二酰脲(母核)、1,3-二酰亚胺(母核基团)。

典型药物:巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥、硫喷妥钠等。

理化性质:弱酸性、水解性、金属离子反应、香草醛反应、紫外吸收特性、显微结晶。

*扩展 理化性质 [ 口诀:银白铜钴紫硫蓝 ]

a.弱酸性:二酰亚胺上氢受邻位羟基影响,发生质子转移(发生二级电离);

b.水解性:酰亚胺结构与碱液共沸,水解释放出NH3,可使红色石蕊试纸变蓝。

c.与金属离子反应(含丙二酰脲)

银盐(在Na2CO3溶液中生成钠盐而溶解,再与硝酸银反应,先生成一银盐,硝酸银过量时生成二银盐。一银盐可溶解,二银盐不溶。)

铜盐(在吡啶溶液中生成烯醇式异构体,再与铜-吡啶试液反应,生成紫色配合物。鉴别含S巴比妥类药物:与铜盐反应显绿色)

钴盐(碱性溶液中与钴盐反应,生成紫堇色配合物)

汞盐(与硝酸汞或氯化汞反应,生成白色沉淀,沉淀能在氨试液中溶解)

d.香草醛反应:在浓硫酸存在下与香草醛发生缩合反应,生成棕红色产物。

e.显微结晶:在显微镜下观察,巴比妥为长方形结晶,苯巴比妥开始结晶时球形,后为花瓣状。

2、鉴别实验

1)丙二酰脲反应

a.银盐反应:与碳酸钠、硝酸银反应,生成白色沉淀,沉淀振摇即溶解,硝酸银过量时沉淀不溶解。

b.铜盐反应:在吡啶溶液中溶解后,与铜吡啶试液反应,显紫色。(或生成紫色沉淀)

2)特征基团反应

a.硫元素:在NaOH溶液中与Pb离子反应,生成白色沉淀。

b.不饱和取代基:分子结构含有丙烯基,可与I2、Br2或KMnO4作用,发生加成反应,使其褪色。

C.芳环取代基

硝化反应(与KNO3及H2SO4共热,生成黄色硝基化物)

亚硝酸钠反应(苯巴比妥与硫酸-亚硝酸钠反应,生成橙黄色产物,ChP用于鉴别苯巴比妥和苯巴比妥片)

甲醛-硫酸反应(苯巴比妥与甲醛-硫酸反应,生成玫瑰红色产物,用于鉴别巴比妥和无芳环取代的巴比妥类药物)

*扩展 鉴别试验

硫代巴比妥——铅离子沉淀; 司可巴比妥——高锰酸钾褪色;

苯巴比妥——硝化反应,显黄色;甲醛-硫酸反应,玫瑰红。

3、特殊杂质的检查

项目:酸度(甲基橙指示剂)、乙醇溶液的澄清度、中性或碱性物质(提取重量法)、有关物质。

4、含量测定

方法:银量法、溴量法、紫外分光法、酸碱滴定法、提取重量法、HPLC法、GC法及电泳法。

a.银量法:ChP采用甲醇和3%无水Na2CO3溶剂系统,以银-玻璃电极电位法指示终点。

b.溴量法:用于司可巴比妥原料药及其胶囊的测定。(滴定比例1:1)

c.酸碱滴定法:包括水-乙醇混合溶剂滴定、胶束水溶液滴定、非水溶液滴定(指示剂为麝香草酚蓝)。

d.其他方法(略)

第二节 苯并二氮杂卓类药物的分析

1、性质

用途:用于抗焦虑、抗惊厥。

结构:苯环、七元含氮杂环。

典型药物:地西泮、氟硝西泮、氯氮卓、三唑仑、奥沙西泮、劳拉西泮等。

理化性质:弱碱性(N杂环)、水解性(在强酸溶液中水解生成二苯甲酮衍生物)、紫外特性。

(注:地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸,可用于专属鉴别。)

2、鉴别试验

a.生物碱沉淀反应:遇碘化铋钾试液显橙红色沉淀。

b.硫酸-荧光反应:地西泮 + 浓H2SO4 → 黄绿色 (或) + 稀H2SO4 → 黄色。

氯氮卓 + 浓H2SO4 → 黄色 (或) + 稀H2SO4 → 紫色。

c.氯化物的鉴别:略。

d.芳伯胺的反应:重氮化-偶合反应。(或亚硝酸钠反应)

e.其他:略。

3、特殊杂质与检查

方法:GC法或HPLC法。(注:三唑仑采用HPLC法1%溶液主成份自身对照法检查。)

4、含量测定

1)非水溶液滴定法(原料药的测定)

a.非水碱量法:pKa为8~10时,冰醋酸溶剂;pKa为10~12时,冰醋酸与醋酐混合溶剂;pKa〉12时,醋酐溶剂。

b.非水酸量法:采用氢氧化四丁基铵为滴定液,以电位法指示终点。

2)紫外分光法

a.对照品比较法 b.吸收系数法

(注:本类药物中,原料药仅奥沙西泮采用此法测定。)

第十一章 吩噻嗪类抗精神病药物的分析

1、性质

用途:阻断多巴胺受体,治疗Ⅰ型精神分裂症(控制幻觉和妄想)。

结构:硫氮杂蒽(母核)、2位和10位取代基。

典型药物:盐酸氯丙嗪、盐酸异丙嗪、奋乃静、氟奋乃静、盐酸氟奋乃静等。

理化性质:弱碱性(含N)、还原性(用于鉴别)、氧化性(避光)、金属离子配位(S2+)、紫外特性。

2、鉴别试验

a.生物碱沉淀反应:与三硝基苯酚反应,生成沉淀。

b.氧化显色反应:盐酸异丙嗪——与硝酸反应生成红色沉淀,加热即溶解,溶液变为橙黄色。

盐酸氯丙嗪——加硝酸显红→黄,加FeCl3显红色。

c.与钯离子配位反应:葵氟奋乃静与氯化钯反应,生成红色沉淀。

d.卤素取代基的焰色反应:奋乃静在铜网上加热,火焰显绿色。

e.红外分光法:吩噻嗪类原料药均用红外分光法鉴别。

f.色谱法:GC法、HPLC法。(略)

(注:鉴别a盐酸氯丙嗪、b氟奋乃静与c奋乃静:a含Cl,b含F,加入氢氧化钠后a溶c不溶。)

(鉴别盐酸氯丙嗪和盐酸异丙嗪:加硫酸,显樱桃红色的为异丙嗪;加硝酸有红色沉淀的是异丙嗪。)

3、有关物质检查

氯丙嗪:HPLC法。(辛基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈-三氟乙酸为流动相。)

奋乃静:HPLC法。(C18键合硅胶为填充剂,甲醇为流动相。)

4、含量测定

方法:酸碱滴定法、分光法、HPLC法、LC-MS联用法。(奋乃静:原料药用非水法,片剂用紫外法。)

a.非水溶液滴定法:冰醋酸-醋酐为溶剂,高氯酸溶液滴定。(加入醋酸汞可使反应进行完全。)

b.提取后分光法:用分光法测定时,通过提取以排除辅料的干扰。

c.钯离子比色法:略。

d.HPLC法:采用反向RP-HPLC法和离子对色谱法分离,紫外检测器检测。

第十二章 喹啉与青蒿素类抗疟药物的分析

第一节 喹啉类药物的分析

1、性质

用途:抗疟药。

结构:喹啉。

典型药物:硫酸奎宁、磷酸哌奎、磷酸氯喹、磷酸伯氨喹等。

理化性质:碱性(生物碱)、旋光性、荧光特性(蓝色)、紫外特性。

(注:磷酸哌奎和磷酸咯奈啶无手性碳,故无旋光性。)

根据用药目的将抗疟药分为3类:用于控制症状——磷酸氯喹,硫酸奎宁、青蒿素等;

用于控制复发和传播——磷酸伯氨喹;

用于病因学预防——乙胺嘧啶、磺胺类

2、鉴别试验

a.绿奎宁反应:奎宁经氯水氧化,氨水处理缩合,生成绿色的铵盐。

b.硫酸盐的鉴别反应:BaCl2生成白色沉淀;加醋酸铅生成白色沉淀,沉淀在氨试液中溶解。

c.氯化物的鉴别反应:AgNO3生成白色沉淀;加MnO2加热产生Cl2,使淀粉试纸变蓝。

d.磷酸盐的鉴别反应:加AgNO3生成黄色沉淀;加氯化铵镁生成白色沉淀;加钼酸铵与硝酸生成黄色沉淀。

e.荧光反应:硫酸奎宁和二盐酸奎宁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光。

3、纯度检查

a.硫酸奎宁的纯度检查:酸度、三氯甲烷-乙醇中不溶物质、其他金鸡纳碱。

b.磷酸咯奈啶的纯度检查:酸度、水中不溶物、氯化物、甲醛、四氢吡咯。

4、含量测定

1)硫酸奎宁的含量测定

硫酸奎宁:非水溶液滴定法。1mol硫酸奎宁消耗3mol高氯酸滴定液。(加入冰醋酸,发生一级电离)

硫酸奎宁片:非水溶液滴定法。1mol硫酸奎宁消耗4mol高氯酸滴定液。(未加冰醋酸,发生二级电离)

第二节 青蒿素类药物的分析

1、性质

用途:Ⅰ类抗疟药。

结构:倍半萜内酯、过氧桥。

典型药物:青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚等。

理化性质:氧化性、旋光性(右旋)、水解性(内酯)、紫外特性。

2、鉴别试验

a.过氧桥的氧化反应:酸性条件下与KI试液反应,淀粉指示液显蓝紫色。

b.羟肟酸铁反应:在碱性条件下与羟胺作用生成羟肟酸,在烯酸中与高铁离子呈紫红色。

c.香草醛-硫酸反应:加入香草醛-硫酸试剂,显红色。

3、纯度检查

项目:有关物质(衍生物、结构类似物)。

4、含量测定

方法:青蒿素类原料药采用HPLC法测定,双氢青蒿素采用水解后UV法。

第十三章 莨菪烷类抗胆碱药物的分析

1、性质

用途:生物碱类抗胆碱药。

结构:含氧桥环、苯环取代基。

典型药物:硫酸阿托品、氢溴酸后阿托品、硫酸莨菪碱、山莨菪碱、东莨菪碱等

理化性质:水解性(酯键)、碱性(叔胺氮)、旋光性。

(注:阿托品类药无旋光性,而东莨菪碱有旋光性,可用于鉴别。)

2、鉴别试验

a.托烷生物碱Vitali反应:酯键水解后,经发烟硝酸加热,再与KOH醇溶液和固体KOH作用,显深紫色。

b.硫酸-重铬酸钾反应:本类药物水解后,与硫酸-重铬酸钾加热反应,产生苦杏仁臭味。

c.生物碱显色/沉淀反应:常用沉淀剂如碘化铋钾、三硝基苯酚、磷钨酸等。

d.光谱法、色谱法。(略)

e.硫酸盐和溴化物的反应:莨菪烷类药物制品水溶液大多为硫酸盐和氢溴酸盐,因此鉴别。

3、特殊杂质与检查

项目:酸度(pH4.0~5.5)、易氧化物、其他生物碱。

4、含量测定

1)酸性染料比色法

基本原理:在适当pH水溶液中,碱性药物与H+结合成阳离子,而一些酸性染料可解离成阴离子;两种离子定量地结合,生成具有吸收光谱明显红移的有色离子对。

反应式原理:略。

酸性染料:溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、溴酚蓝等。

影响因素:水相的pH、酸性染料的种类及浓度、有机溶剂的选择、有机相的水分、酸性染料中有色杂质。

2)非水溶液滴定法

注:硫酸阿托品与高氯酸反应的化学计量比为1:1。(硫酸在冰醋酸中发生一级解离)

注:醋酸汞作用:消除氢氯酸盐的干扰。

3)高效液相色谱法

分析碱性物质——阴离子对试剂——戊烷/庚烷/十二烷磺酸钠。

分离酸性物质——阳离子对试剂——四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵。

常用扫尾剂:醋酸铵、三乙胺、二乙胺等。

第十四章 维生素类药物的分析

第一节 维生素A的分析

1、性质

结构:环己烯、共轭多烯醇侧链。

自然来源:海鱼肝脏提取的脂肪油,通称鱼肝油。

理化性质:溶解性(脂溶性)、不稳定性(易氧化)、紫外特性(共轭烯烃)。

(注:维生素A1又称视黄醇;鱼肝油中维生素A主要为醋酸酯和棕榈酸酯。)

(维生素按溶解度分为脂溶性——A、D、E、K等;和水溶性——B、C、烟酸、叶酸等。)

2、鉴别试验

a.三氯化锑反应:维生素A在无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中显蓝色,渐变为紫红色。

(注:反应必须在无水、无醇条件下进行。)

b.紫外分光法、薄层色谱法。(略)

3、含量测定

1)紫外分光法(三点校正法)

方法:三点校正法。(目的:消除无关吸收的干扰)

原理:a.杂质的无关吸收在310~340nm处几乎呈一条直线。

b.物质对光的吸收具有加和性。

测定法:直接滴定法(测定维A醋酸酯)、皂化法(测定维A醇)。

校正吸光度:A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)

维生素A醋酸酯的计算 ☆☆☆

(见P350)

A为A328或A校正;D为稀释倍数;1900为换算因子;W为内容物称量;B为标示量。

(注:若吸光度差值超过0.02时,计算A校正,若A校正与A的差值在-15%~3%时,用A校正计算。)

2)高效液相色谱法

条件:硅胶为填充剂,正己烷-异丙醇为流动相,检测波长为325nm。

3)三氯化锑比色法(略)

第二节 维生素B1的分析

1、性质

结构:氨基嘧啶环、噻唑环。(含S含N)

自然来源:广泛存在于米糠、麦麸、酵母中。

理化性质:溶解性(水溶性)、紫外特性。

2、鉴别试验

a.硫色素荧光反应:在碱性溶液中,被铁氰化钾氧化,与正丁醇中显蓝色荧光。

b.沉淀反应:嘧啶环和氨基具有生物碱的特征,可与生物碱沉淀剂反应。[碘红汞钾黄钨白]

c.氯化物鉴别反应:略。

d.硫元素反应:与NaOH共热,再与硝酸铅反应生成黑色沉淀。

3、含量测定

a.非水滴定法:1mol维生素B1消耗2mol高氯酸滴定液。(维生素B1具有2个碱性基团)

b.紫外分光法。(略)

c.硫色素荧光法。(略)

第三节 维生素C的分析

1、性质

用途:抗坏血酸。

结构:烯二醇、内酯环。

理化性质:溶解性(水溶性)、酸性(一元酸)、旋光性、还原性、水解性、糖类性质、紫外特性。

2、鉴别试验

a.与硝酸银反应:烯二醇具有强还原性,可被硝酸银氧化,产生黑色金属银沉淀。

b.与二氯靛粉钠反应:2,6-二氯靛粉钠在酸性介质中为玫瑰红色,碱性介质中为蓝色。与维生素C作用后生成还原型无色的酚亚胺。

c.与其他氧化剂反应:氧化剂如亚甲蓝、高锰酸钾、碱性酒石酸铜、磷钼酸等。

d.薄层色谱法:略。

e.糖类的反应:维C可在三氯醋酸存在下转化为糠醛,加入吡咯,加热至50℃呈现蓝色。

3、杂质检查

项目:溶液的澄清度与颜色检查、铁/铜离子的检查(原子吸收光度法)、草酸的检查(比浊法)。

4、含量测定

a.碘量法:略。(丙酮的目的:消除抗氧剂/掩蔽剂的干扰。)

b.二氯靛粉滴定法:略。

c.高效液相色谱法:固定相为C18键合硅胶,流动相为甲醇-偏磷酸溶液。

第四节 维生素D的分析

1、性质

用途:抗佝偻病。

结构:开环麦角甾醇。

理化性质:溶解性(脂溶性)、不稳定性、旋光性(D2-6碳;D3-4碳)、紫外特性。

2、鉴别试验

a.醋酐-浓硫酸反应(红-紫-蓝-绿) b.三氯化锑反应(粉红色) c.三氯化铁反应(橙黄色)

b.薄层色谱法、HPLC法:鉴别维生素D2和D3。

3、杂质检查

注:ChP规定,维生素D2检查麦角甾醇,而维生素D3未要求。

4、含量测定

方法:正相高效液相色谱。

第五节 维生素E的分析

1、性质

用途:生育酚。

结构:苯并二氢吡喃醇衍生物、苯环、酚羟基。

理化性质:溶解性(脂溶性)、水解性、还原性、紫外特性。

(注:维生素E的天然品为右旋体,合成品为消旋体。)

2、鉴别试验

a.硝酸反应:在硝酸酸性条件下水解成生育酚,继续被硝酸氧化,显橙红色。

b.三氯化铁反应:在碱性条件下水解成生育酚,被Fe3+氧化后,与联吡啶反应,显红色。

c.紫外分光法、薄层色谱法:略。

3、杂质检查

项目:酸度、生育酚(硫酸铈滴定法,二苯胺试剂,亮黄色)、有关物质、残留溶剂(气相色谱法)。

(注:维生素E中生育酚的检查是唯一用滴定法检查杂质的有机物。)

4、含量测定

方法:GC法(采用正三十二烷内标法,固定液为硅酮)

HPLC法(固定相为C18,流动相为甲醇-水。)

第十五章 甾体激素类药物的分析

1、性质

结构:环戊烷并多氢菲。

药理分类:肾上腺皮质激素、性激素(雄激素、雌激素、孕激素)。

骨架分类:雄甾烷、雌甾烷、孕甾烷。(根据C10、C13、C17位取代基的不同分类)

理化性质:溶解性(脂溶性)、旋光性、紫外吸收特性、

结构特征:肾上腺皮质激素——A环有Δ4-3-铜基,有紫外吸收;C17位有α-醇酮基,具有还原性。

雄激素——A环有Δ4-3-铜基;C17位有羟基。

孕激素——A环有Δ4-3-铜基;C17位有甲酮基、羟基。

雌激素——A环为苯环,C3位有酚羟基;C17位偶羟基、乙炔基。

2、鉴别试验

a.硫酸显色反应:氢化可的松在硫酸作用下,显棕黄色并有绿色荧光,加水稀释后显黄色,有絮状沉淀。

b.C17-甲酮基反应:黄体酮与亚硝基铁氰化钠反应,生成蓝紫色产物。

c.C17-α-醇酮基反应:加碱性酒石酸显砖红色沉淀;加氯化三苯四氮唑显红色;加氨制硝酸银显黑色沉淀。

d.炔基的沉淀反应:与硝酸银反应,生成白色的沉淀。

e.紫外分光法:含Δ4-3-铜基的药物在240nm处有最大紫外吸收。

A环具有酚羟基的雌激素在280nm处有最大吸收。

f.红外分光法、色谱法:略。

3、特殊杂质与检查

项目:有关物质(甾体类似物,色谱法)、硒的检查(氧瓶燃烧法)、残留溶剂(GC法)、游离磷酸盐(磷钼酸比色法)。

4、含量测定

a.HPLC法:C18为填充剂,三乙胺-甲醇-乙腈为流动相,检测波长为242nm。

b.四氮唑比色法:皮质激素(C17位醇酮基)在强碱溶液中将四氮唑盐还原成有色甲簪。

c.异烟肼比色法:甾体激素(C3酮基)在酸性条件下与羰基试剂(异烟肼)反应,生成黄色产物。

d.Kober反应:雌激素与硫酸-乙醇反应,显红色,并在520nm附近有最大吸收。

第十六章 抗生素类药物的分析

第一节 概述

1)检查

项目包括:结晶性、溶液澄清度、酸碱度、毒性、热源、内毒素等。

2)含量测定

测定方法:微生物检定法(管碟法、浊度法)、HPLC法。

第二节 β-内酰胺类抗生素

1、性质

结构:β-内酰胺环、6-氨基青霉烷酸。(母核,简称6-APA)

典型药物:青霉素类——阿莫西林、青霉素钠、氨苄西林、普鲁卡因青霉素等。

头孢菌素类——头孢他啶、头孢克洛、头孢拉定、头孢氨苄等。

理化性质:不稳定性(内酰环)、旋光性(青霉C3头孢C2)、酸性与溶解度、紫外特性(含苯环侧链)。

(注:青霉素的碱金属盐水溶液遇酸析出白色沉淀。)

(注:头孢菌素类有紫外特性,而青霉素类只有侧链含苯环时才有紫外特性。)

*扩展 青霉素的降解反应

降解: H2O,OH-或青霉素酶 → 青霉噻唑酸 NH2OH → 异羟肟酸

pH=2 → 青霉酸 pH=4 → 青霉烯酸 100℃ → 青霉醛

2、鉴别试验

a.色谱、HPLC法:略。

b.异羟肟酸铁反应:在碱性中与羟胺反应生成羟肟酸,在烯酸中与Fe3+反应,呈紫红色。

c.双缩脲/茚三酮反应:本类药物含α-氨基酸结构,反应显蓝紫色,可用于鉴别。

d.重氮苯磺酸反应:本类药物含酚羟基,可用此鉴别。

e.硫酸呈色反应:头孢氨苄/黄色、头孢噻肟钠/亮黄色、头孢噻吩钠/红棕色。

3、特殊杂质检查

项目:高分子聚合物(分子排阻法)、有关物质(TLC法)、异构体、吸光度、有机溶剂、结晶性。

4、含量测定

方法:微生物检定法、HPLC法

(注:除氨苄西林钠采用微生物检定法,其余均采用HPLC法。)

第三节 氨基糖苷类抗生素

1、性质

结构:链酶胍、链酶双糖胺(链霉素)、环己多元醇(苷元)。

典型药物:链霉素、庆大霉素、奈替米星、阿米卡星等。

理化性质:溶解性(水)、碱性、旋光性、水解性与稳定性(苷键)、紫外特性。

(注:链霉素在230nm处有最大吸收,庆大霉素、奈替米星等无紫外吸收,可用于鉴别庆大霉素。)

2、鉴别试验

a.茚三酮反应:氨基糖苷类含α-氨基酸,反应显蓝紫色,可用于鉴别。

b.Molisch反应:具有五碳糖或六碳糖,在盐酸作用下,与α-萘酚(紫红色)或蒽酮(蓝紫色)显色反应。

c.N-甲基葡萄糖胺反应:经水解后,在碱性条件下与乙酰丙酮、对二甲氨基苯甲醛反应,呈樱桃红色。

d.麦芽酚反应:链霉素分特征反应。麦芽酚与Fe3+作用,显紫红色。

e.坂口反应:链酶胍的特有反应。反应产物显橙红色。

f.TLC法、HPLC法:略。

3、特殊杂质与检查

项目:有关物质(链霉素含链霉素B)、组分测定(庆大霉素)、硫酸盐检查(络合法或HPLC法)。

4、含量测定

方法:HPLC-蒸发光散射法。(固定相为C18,流动相为三氟醋酸-甲醇。)

第四节 四环素类抗生素

1、性质

结构:四并苯或萘并苯。

典型药物:土霉素、四环素、金霉素、米诺环素、多西环素等。

理化性质:酸碱性(两性)、旋光性、紫外特性、荧光特性(土霉素/绿色、金霉素/蓝色)、稳定性。

(注:四环素类抗生素的溶解度与pH有关,强酸或强碱时易溶于水。)

*扩展 四环素的稳定性

a.差向异构化(A环):pH2.0~6.0时,四环素/金霉素差向异构化产生差向四环素/金霉素。

b.降解(C环脱水):pH<2时,四环素/金霉素脱水产生脱水四环素/金霉素。

c.碱性降解:四环素在碱性条件时,产生异四环素,并具有荧光。

2、鉴别试验

方法:HPLC法、显色法(四环素/硫酸反应、三氯化铁反应)。

3、杂质检查

项目:有关物质(异构体、降解产物)、杂质吸光度、残留有机溶剂。

(注:抗生素类高分子杂质的检查方法:凝胶色谱法。)

4、含量测定

方法:HPLC。(填充剂为C18,流动相为醋酸铵-乙腈溶液。)

第十七章 合成抗菌药的分析

第一节 喹诺酮类药物的分析

1、性质

结构:吡啶酮酸并联苯环、吡啶环或嘧啶环。

典型药物:诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星等。

理化性质:酸碱性(两性)、溶解性(水)、紫外特性、旋光性、光毒性、金属离子反应。

(左氧氟沙星具有旋光性、而氧氟沙星和环丙沙星等无旋光性。)

2、鉴别试验

a.丙二酸反应:喹诺酮类药物(叔胺)的特有反应。

b.其他:紫外、红外、色谱、HPLC法。(略)

3、特殊杂质检查

项目:工艺杂质(副产物、异构体)、降解产物、溶液的澄清度与颜色。

4、含量测定

a.非水溶液滴定法:测定吡哌酸等。

b.紫外分光法:测定诺氟沙星等。

c.HPLC法:ChP除吡哌酸外喹诺酮类药的测定。

第二节 磺胺类药物的分析

1、性质

结构:对氨基苯磺酰胺。

典型药物:磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑等。

理化性质:溶解性(溶于酸碱)、熔融变色性、酸碱性(两性)、磺酰胺基特性。

2、鉴别试验

a.金属离子取代反应:甲噁唑/草绿色、异噁唑/暗绿色、磺胺嘧啶/黄绿色变为紫色。

b.重氮化-偶合反应:略。

c.红外分光法、HPLC法:略。

3、鉴别试验

项目:氯化物、炽灼残渣、酸度、溶液澄清度、有关物质(TLC法)。

4、含量测定

方法:HPLC法(片剂)、NaNO2滴定法(原料药)、非水滴定法。

第十八章 药物制剂分析概论

知识点

1、药物制剂检查包括:杂质检查、剂型检查、安全性检查。

2、剂型检查包括:重量差异与含量均匀度、崩解时限与溶出度、

3、剂型与安全性检查包括:装量、渗透压摩尔浓度、可见异物、不溶性微粒、无菌、细菌内毒素与热源等。

注:异物检查——灯检法、光散射法。

不溶性微粒检查——光阻法、显微计数法。

无菌检查——薄膜过滤法、直接接种法。

内毒素检查——鲎试剂检测。(凝胶法、光度测定法)

4、含量测定

注:溶剂水的干扰——非水溶液滴定法。

溶剂油的干扰——有机溶剂稀释法、萃取法、柱色谱法。

抗氧剂的干扰——加掩蔽剂、加酸分解。

第十九章 中药制剂分析概论

知识点

1、中药的鉴别:性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别、色谱鉴别。

2、中药的检查项目:杂质、水分、总灰分和酸不溶性灰分、重金属、农药残留、有关物质。

3、中药的其他杂质:黄曲霉素、乙醇量、膨胀度、酸败度。

第二十章 生物制品分析

知识点

1、生物制品分类:疫苗类(细菌类/病毒类/联合疫苗)、抗毒素及抗血清类、血液制品、重组DNA。

2、质量要求:安全性、有效性、可接受性。

3、鉴别试验:免疫双扩散法、免疫电泳法、免疫印迹法、酶联免疫法。

4、检查内容:物理性状、蛋白质含量、防腐剂和灭活剂含量、纯度、相对分子量、安全检查、效力检查、杂质检查、水分、酸碱度等。

来源:答案鬼

相关推荐