摘要：确定蛋白互作水平对于分析细胞内的信号传导、蛋白质功能和激活等至关重要。传统方法（如FRET、PLA）无法区分蛋白的游离态与结合态，存在信号弱、背景噪音高等问题。MolBoolean™技术由 Atlas Antibodies 公司开发，可同时对组织和细胞中两个蛋
转自：优宁维抗体专家
确定蛋白互作水平对于分析细胞内的信号传导、蛋白质功能和激活等至关重要。传统方法（如FRET、PLA）无法区分蛋白的游离态与结合态，存在信号弱、背景噪音高等问题。MolBoolean™ 技术由 Atlas Antibodies 公司开发，可同时对组织和细胞中两个蛋白靶标进行原位邻近分析。与传统方法不同，它能够同时检测游离态和结合态的蛋白（检测范围约40纳米），提供蛋白互作的空间定量分析。
技术特点
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全面的空间定量分析：同时检测游离态和结合态的蛋白，提供完整的蛋白互作定量分析。
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精准定量：通过将互作数据与总蛋白水平进行归一化处理，确保定量结果的准确性。
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无需基因改造：无需对蛋白质进行基因工程改造，直接在天然细胞和组织中检测，数据更贴近真实生物学状态。
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超灵敏检测：借助滚环扩增（Rolling Circle Amplification, RCA）技术，荧光信号增强1000倍，能够检测到低丰度蛋白质。
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灵活通用：适用于多种研究需求，用户可自行选择一抗与其搭配使用。
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细胞和组织均验证有效：适用广泛。
应用举例
01
MCF7细胞E-Cad/ β-Cat的MolBoolean染色
对MCF7细胞中E-cadherin与β-catenin的进行检测，图像显示了游离蛋白与相互作用蛋白的比例相对定量，通过在单个或两个荧光通道中检测滚环扩增产物（RCPs）来实现：32%为游离E-钙粘蛋白（品红色），19%为游离β-连环蛋白（绿色），49%为E-钙粘蛋白/β-连环蛋白复合物（白色）。数据已归一化至总目标蛋白水平（总RCPs）。
02
MCF7细胞的EMD/LMNB1 的MolBoolean染色
使用Atlas Antibodies AB的抗EMD抗体和抗LMNB1抗体，对MCF7细胞中EMD（品红）与LMNB1（绿色）的互作进行检测。图像通过单/双荧光通道检测滚环扩增产物（RCPs），直观显示游离态与互作态蛋白的空间定位。
03
人肾脏ACE2/TMPRSS2的MolBoolean染色
利用MolBoolean™技术分析人肾脏组织中ACE2与TMPRSS2的相互作用。
图像显示了游离蛋白与相互作用蛋白的相对定量，通过在单个或两个荧光通道中检测滚环扩增产物（RCPs）来实现：51%为游离ACE2（品红色），17%为游离TMPRSS2（绿色），32%为ACE2/TMPRSS2复合物（白色）。数据已归一化至总目标蛋白水平（总RCPs）
04
人结肠SATB2/HDAC1 的MolBoolean染色
使用Atlas Antibodies AB的抗SATB2抗体和抗HDAC1抗体，对人结肠中SATB2（品红）与HDAC1（绿色）的互作进行检测。图像通过单/双荧光通道检测滚环扩增产物（RCPs），直观显示游离态与互作态蛋白的空间定位。
检测原理
MolBoolean™小鼠/兔试剂盒使用两种不同的免疫荧光检测报告分子，最大发射波长分别为590纳米（ATTO565，使用TxRed滤光片或类似）和664纳米（ATTO647N，使用Y5滤光片或类似）。用户可自行选择一抗（抗小鼠/兔），利用抗小鼠和兔的二级邻近探针以及滚环扩增（Rolling circle amplification ，RCA）技术来放大信号，无需特殊设备，常规荧光显微镜即可完成成像。配套分析软件自动分割荧光信号，对样本中两种分析蛋白靶标的游离态与结合态的比例进行相对定量。
操作步骤
MolBoolean™ 检测为期2天，包含7个步骤，用以确定目标蛋白是否相互作用（形成AB复合物）或单独存在（A或B）。
第1天（2小时）：封闭反应并孵育初级抗体。
第2天（7-8小时）：探针结合、标记、扩增和检测。
1.邻近探针与附着在蛋白上的初级抗体结合。
2. 邻近探针与DNA环相连。
3. DNA切割为DNA标记做准备。
4. 添加标记寡核苷酸以标记蛋白。
5. DNA连接将DNA片段连接起来。
6. 滚环扩增（RCA）增强信号，便于检测。
7. 检测揭示相互作用和单独存在的蛋白。
试剂盒组分及规格
MolBoolean™试剂盒包含15个独立的组分：酶（切口酶、连接酶、聚合酶）、缓冲液、用于标记和检测的寡核苷酸、二级抗体探针以及封闭剂和稀释剂等，总体积为4.8毫升，足够进行大约120次细胞实验（每次实验40微升）和60次组织实验（每次实验80微升）。
用户可以自行挑选一抗（小鼠/兔）与MolBoolean试剂盒搭配使用。需要注意的是，一抗特异性可能会影响MolBoolean结果的准确性，因此建议选择特异性更强的一抗，例如Atlas antibodies公司的产品。
发表文献
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5. Rivas-Santisteban R, et al, (2023) Boolean analysis shows a high proportion of dopamine D2 receptors interacting with adenosine A2A receptors in striatal medium spiny neurons of mouse and non-human primate models of Parkinson’s disease. Neurobiol Dis. 2023 Nov;188:106341.doi: 10.1016/j.nbd.2023.106341. Epub 2023 Oct 31. PMID: 37918757.
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来源：新浪财经
