总胆固醇检测试剂盒，适用于血清、血浆、细胞悬浮液和组织匀浆

摘要：总胆固醇检测试剂盒(比色法)（#STA-384）测量血清、血浆、裂解物、或组织样本。该测定基于酶驱动的反应，可量化胆固醇酯类和游离胆固醇。胆固醇酯通过胆固醇酯酶水解成胆固醇，然后被胆固醇氧化酶氧化成酮胆甾-4-烯-3-酮加氢过氧化物。然后用高度特异的比色探针检

总胆固醇检测试剂盒(比色法)（#STA-384）测量血清、血浆、裂解物、或组织样本。该测定基于酶驱动的反应，可量化胆固醇酯类和游离胆固醇。胆固醇酯通过胆固醇酯酶水解成胆固醇，然后被胆固醇氧化酶氧化成酮胆甾-4-烯-3-酮加氢过氧化物。然后用高度特异的比色探针检测过氧化氢。辣根过氧化物酶催化探针与过氧化氢之间的反应，过氧化氢与辣根过氧化物酶结合1:1的比例。将样品与96孔中已知浓度的胆固醇标准品进行比较微量滴定板格式。将样品和标准品孵育45分钟，然后用标准96孔比色板读数器。

艾美捷总胆固醇检测试剂盒(比色法)（#STA-384）组成：

盒子1（室温运输）：

1. 胆固醇标准品（部件编号239001）：一支50 µL管，含10 mM乙醇溶液中的胆固醇。

2. 检测稀释液（5倍）（部件编号239002）：一瓶100 mL。

3. 50倍比色探针（部件编号238401）：一支200 µL管，溶于DMSO中。

4. 辣根过氧化物酶（部件编号234402）：两支100 µL管，含100 U/mL甘油溶液中的辣根过氧化物酶。

总胆固醇检测试剂盒(比色法)特点：

1、96孔比色或荧光检测格式

2、检测低至4µM（比色法）或0.2µM（荧光法）的浓度

3、适用于血清、血浆、细胞悬浮液和组织匀浆

4、α-酮戊二酸标准品用于未知样品的定量

样本准备：

样本应立即进行检测，或在检测前储存于-80ºC。样本的最佳实验条件需由研究者自行确定。以下建议仅作为指导方针，可根据需要调整以优化或补充用户的实验设计。建议对样本进行一系列稀释，以获得最佳的检测结果并尽量减少可能的干扰物质。根据需要运行适当的对照组。始终与样本一起运行标准曲线。高浓度的蛋白质可能会干扰检测。在这种情况下，建议使用10kDa分子量截止（MWCO）的离心过滤器对样本进行过滤，以减少蛋白质干扰和浑浊的可能性。

- 组织样本：称取500-1000 mg样本，用剪刀和研钵将其剪碎并研磨，直至组织完全液化。加入2 mL 1X检测缓冲液或PBS，然后在冰上对匀浆进行数次超声处理。以12,000 x g离心10分钟以去除杂质。收集上清液，并在另一个离心管中再次离心以进一步澄清。将上清液转移到新的离心管中，并在冰上孵育。准备好用于检测的样本，并将剩余的上清液储存于-80ºC。在1X检测缓冲液中进行进一步稀释。

- 细胞悬浮液：将细胞制备成1x10⁶细胞/mL的浓度，并用0.2 mL冷PBS或1X检测缓冲液快速匀浆细胞沉淀。以12,000 x g离心10分钟以去除杂质。将上清液转移到新的离心管中，并在冰上孵育。准备好用于检测的样本，并将剩余的上清液储存于-80ºC。在1X检测缓冲液中进行进一步稀释。

- 血清：采集血液时不要使用抗凝剂。让血液在室温下凝固30分钟。在4ºC下以2000 x g离心10分钟。小心地移除血清层，并将其置于冰上。注意避免干扰白色的白细胞层。分装样本用于检测，并将剩余溶液储存于-80ºC。在1X检测缓冲液中进行血清稀释。进行多次稀释以确保数值在标准曲线范围内。

- 血浆：使用肝素或柠檬酸（EDTA可能会导致猝灭效应）采集血液，并在4ºC下以1000 x g离心10分钟。小心地移除血浆层，并将其置于冰上。注意避免干扰白色的白细胞层。分装样本用于检测，并将剩余溶液储存于-80ºC。在1X检测缓冲液中进行血浆稀释。进行多次稀释以确保数值在标准曲线范围内。

注意事项：

1. NADH浓度高于10 µM和谷胱甘肽浓度高于50 µM的样本会氧化比色探针，可能导致错误的读数。为了尽量减少这种干扰，建议在反应中加入超氧化物歧化酶（SOD），最终浓度为40 U/mL。

2. 避免使用含有DTT或β-巯基乙醇的样本，因为比色探针在硫醇（高于10 µM）存在时不稳定。

3. 比色探针在高pH（>8.5）条件下不稳定。

结果示例：