摘要：pH 敏感型 IgG 标记试剂提供了一种测量抗体内化活性的简便方法。该试剂利用 pH 敏感型荧光标记 Fc 结合蛋白，该蛋白可与来自不同物种的 IgG 抗体结合，从而形成荧光标记的抗体-试剂复合物。抗体内化后，周围的 pH 变为酸性，显著增强抗体-试剂复合物的

一、pH-sensitive IgG labeling reagents plus

The fluorescent signal from GPRC5D ADC BMK-UA070080 conjugate is only detected in GPRC5D positive cells (K562-GPRC5D stable expression cell line), indicating specific internalization.

pH 敏感型 IgG 标记试剂提供了一种测量抗体内化活性的简便方法。该试剂利用 pH 敏感型荧光标记 Fc 结合蛋白，该蛋白可与来自不同物种的 IgG 抗体结合，从而形成荧光标记的抗体-试剂复合物。抗体内化后，周围的 pH 变为酸性，显著增强抗体-试剂复合物的荧光信号。荧光强度可用作确定抗体内化活性的指标。通过测量荧光信号的强度，研究人员可以评估抗体内化进入细胞的效率。这些信息对于了解抗体的细胞摄取机制以及评估其在靶向治疗或诊断应用中的功效至关重要。此外，监测荧光强度还可以深入了解抗体内化的动力学，帮助研究人员优化实验条件并改进基于抗体的药物递送系统的设计。

本产品可用于人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、兔IgG、小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3，可用流式细胞仪FITC或AF488滤光片检测。

二、 DT3C重组蛋白

抗体内化效率检测原理及步骤

原则：

DT3C（白喉毒素片段A和链球菌G组蛋白C1、C2、C3）是一种重组表达的融合蛋白，由白喉毒素的片段A（仅毒素部分）与G组链球菌的3C片段（IgG结合部分）融合而成。该蛋白与抗体的Fc端有很高的亲和力，抗体内化时与抗体结合的DT3C分子一起进入细胞内。DT3C可以与任何IgG型抗体结合，因此可以用来检测不同种属抗体的内化效率。DT3C与抗体结合后形成的mAb-DT3C偶联物在体外模拟了ADC药物的作用机制，有助于在药物研发早期评估抗体的内化能力和药物的释放效率。

DT3C 由催化 (Cat)、转位 (T) 和 Fc 结合 (3C) 结构域组成。DT3C 的 Fc 结合结构域可特异性地与抗体结合。

mAb-DT3C偶联复合物识别并结合细胞表面抗原后，mAb-DT3C-抗原复合物被内化，DT3C的转位端被细胞弗林蛋白酶裂解，DT3C的催化结构域被释放到细胞质中，DT3C释放出毒性DT，可抑制EF2-ADP核糖基化活性，阻断蛋白质翻译过程，最终导致细胞死亡。

未进入细胞的DT3C不具有细胞杀伤活性，因此可根据细胞杀伤情况来评估抗体的内化效率。

测试步骤：

mAb-DT3C偶联物的制备：将DT3C蛋白与目标抗体在室温下孵育30分钟，形成mAb-DT3C偶联物。

共培养：将mAb-DT3C偶联物直接加入到含有抗原阳性细胞（如肿瘤细胞）的完全培养基中进行孵育。

3.检测内化效率：通过MTT、WST-1、CellTiter-Glo、流式细胞仪等方法检测细胞活力或者细胞死亡，评估抗体在细胞表面的内化效率。

DT3C检测ADC药物抗体内化效率的优势

适用性广：可以与不同物种（如人、小鼠、兔、山羊）的任何IgG结合。

高效性：室温孵育30分钟即可形成mAb-DT3C偶联物，DT3C可在细胞内快速释放毒性DT，从而快速评估抗体的内化效率。

内化效率高：分子量较Mab-ZAP小，mAb-DT3C的内化效率高于mAb-Mab-ZAP。

便捷性：可通过流式细胞术或荧光显微镜等方法快速、准确地检测mAb在细胞表面的内化效率。

注意：进行体外测试时，应保证实验条件的一致性，如细胞种类、细胞浓度、DT3C与抗体的比例、孵育时间等。实验过程中需严格控制无菌操作，避免外界因素的干扰。

产品信息

文章来源：https://www.starter-bio.com/articledetail.html?nid=165

来源：斯达特生物