摘要：体外培养黑素细胞可用于酪氨酸酶活性测定和细胞中黑素含量测定，是研究美白活性物质的最常用方法，一般采用分光光度法、图像分析技术法或MTT法测定美白活性成分对黑素细胞生长情况的抑制作用、酪氨酸酶活性和黑素含量等关键指标。

体外培养黑素细胞可用于酪氨酸酶活性测定和细胞中黑素含量测定，是研究美白活性物质的最常用方法，一般采用分光光度法、图像分析技术法或MTT法测定美白活性成分对黑素细胞生长情况的抑制作用、酪氨酸酶活性和黑素含量等关键指标。

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MTT分析法

MTT法广泛用于检测细胞增殖及细胞毒性。通过四噻唑盐比色法(Methylthiazoltetrazolium，MTT)检测美白活性物质对黑素细胞生长情况的抑制作用，或通过光镜、电镜观察黑素细胞外部形态，研究美白成分对黑素细胞形态、结构的影响。

原理：活细胞的线粒体脱氢酶可以还原黄色的MTT溶液为蓝色甲臜(Formazan)结晶颗粒，蓝色甲结晶的生成量仅与活细胞数目成正比，沉积在细胞中，死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原；用DMSO等试剂溶解甲臜后的溶液在一定波长下比色测定的吸光值与活细胞数量及代谢活性成正比，利用酶标仪测定490nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。

乳酸脱氢酶(LDH)测定法

乳酸脱氢酶(Lactatedehydrogenase，LDH)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原子或电子从一种底物转移到另一种底物上，乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的酶含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中能可逆的催化乳酸(L)和丙酮酸(P)之间的氧化还原反应。

当细胞凋亡、坏死或者受到损伤时，造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的LDH被释放到培养液里，通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH的释放量与细胞死亡程度呈正相关，LDH释放可作为细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。

乳酸脱氢酶(LDH)法检测就是利用LDH将氧化性的辅酶NAD+还原成NADH，并将L-乳酸氧化成丙酮酸(Pyruvate)。接着硫辛酰胺脱氢酶(Diaphorase)催化NADH和INT(碘硝基氯化四氮唑蓝，lodonitrotrtrazoliumchloride)反应生成NAD+和红紫色Formazan结晶，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。

图像分析法

利用显微镜可以观察美白成分对黑素细胞生长情况的影响。人体原代黑素细胞或B16黑素细胞，将黑素细胞数量培养至足够实验的数量时，调节细胞浓度并加入孔板中，加入DMEM+10%FBS的培养基，培养24h后，取出培养基，再加入DMEM+10%FBS的培养基及待测试的美白成分，培养6，12，24，36，48h后，置于显微镜下观察。

假如该美白成分对黑素细胞产生细胞毒性时，随着时间的变化，细胞存活数目会减少，细胞形态会发生改变；如果该成分对酪氨酸酶活性和黑素有促进作用，黑素细胞的树突和其他形态也会有相应的改变。

来源：说丹丹