OxiSelect体外ROS/RNS检测试剂盒，采用专有的淬灭型荧光探针测定

摘要：活性氧（ROS）和活性氮（RNS）是已知的导致氧化应激有害效应的分子。自由基的积累以及氧化应激的增加已被认为与多种疾病的发生机制有关。氧化应激在血管疾病、糖尿病、肾脏缺血、动脉粥样硬化、肺部病理状态、炎症性疾病、癌症以及衰老中的作用已被广泛证实。自由基和其他活

活性氧（ROS）和活性氮（RNS）是已知的导致氧化应激有害效应的分子。自由基的积累以及氧化应激的增加已被认为与多种疾病的发生机制有关。氧化应激在血管疾病、糖尿病、肾脏缺血、动脉粥样硬化、肺部病理状态、炎症性疾病、癌症以及衰老中的作用已被广泛证实。自由基和其他活性物质在体内不断产生，并对生物分子造成氧化损伤，这一过程通过多种抗氧化和修复系统以及受损核酸、蛋白质和脂质的替换来控制。测量抗氧化疗法的效果以及ROS/RNS活性对于抑制或治疗氧化应激诱导因子至关重要。

OxiSelect™体外ROS/RNS检测试剂盒是一种用于测量样本中总自由基含量的检测工具。该试剂盒采用一种专有的淬灭型荧光探针——二氯二氢荧光素DiOxyQ（DCFH-DiOxyQ），这是一种基于流行的2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯类似化学原理的特异性ROS/RNS探针。DCFH-DiOxyQ探针首先用淬灭去除试剂进行预处理，随后稳定在高活性的DCFH形式中。在这种高活性状态下，ROS和RNS可以与DCFH反应，DCFH迅速被氧化为高荧光的2',7'-二氯荧光素（DCF）。荧光强度与样本中的总ROS/RNS水平成正比。DCFH-DiOxyQ探针可以与过氧化氢（H₂O₂）、过氧自由基（ROO⁻）、一氧化氮（NO）和过氧亚硝酸根（ONOO⁻）反应。这些自由基分子分别代表了ROS和RNS，从而可以测量样本中的总自由基群体。OxiSelect™体外ROS/RNS检测试剂盒还可以用于评估抗氧化剂对自由基的影响。该试剂盒对DCF的检测灵敏度为10 pM，对H₂O₂的检测灵敏度为40 nM。每个试剂盒提供足够的试剂，可进行多达96次检测，包括标准曲线和未知样本。

艾美捷OxiSelect体外ROS/RNS检测试剂盒(绿色荧光)（#STA-347）是一种体外检测工具，用于测量总ROS/RNS自由基活性。未知的ROS或RNS样本或标准品与一种催化剂一起加入孔中，该催化剂有助于加速氧化反应。经过短暂孵育后，将制备好的DCFH探针加入所有孔中，允许氧化反应进行（见图1）。样本通过荧光法与过氧化氢或DCF标准品进行测量。该检测在96孔荧光平板格式中进行，可在标准荧光平板读数器上读取。通过与预先确定的DCF或过氧化氢标准曲线比较，确定未知样本中的自由基含量。

OxiSelect体外ROS/RNS检测试剂盒组分（室温运输）：

1. 预处理试剂（部件编号234701）：1支250 µL溶液管。

2. 稳定化溶液（10X）（部件编号234702）：1支1.5 mL溶液管。

3. 催化剂（250X）（部件编号234703）：1支20 µL溶液管。

4. DCF-DiOxyQ（部件编号234704）：1支50 µL棕色管，甲醇溶液。

5. DCF标准品（部件编号234202）：1支100 µL棕色管，1 mM DMSO溶液。

6. 过氧化氢（部件编号234102）：1支100 µL棕色管，8.821 M溶液。

未提供材料：

1. 磷酸盐缓冲液，用于样本制备和稀释

2. 96孔黑色或荧光微量滴定板

储存：

收到后，将DCF-DiOxyQ和DCF标准品储存于-20ºC。避免多次冻融循环。将所有其他组分储存于4ºC。

试剂准备：

- 1X稳定化溶液：将10X稳定化溶液按1:10稀释，即向1.5 mL溶液中加入13.5 mL去离子水。搅拌或涡旋至均匀。将溶液储存于4ºC。

- 1X催化剂：使用前，将250X催化剂在PBS中按1:250稀释。充分涡旋。仅准备足够立即使用的量（例如，向2.49 mL PBS中加入10 µL催化剂，用于50孔）。

- DCFH溶液：仅在棕色管或用铝箔覆盖的管中准备足够立即使用的DCFH溶液。通过将DCF-DiOxyQ原液与预处理试剂按1:5稀释来制备DCFH溶液（例如，对于50次检测，向100 µL预处理试剂中加入25 µL DCF-DiOxyQ）。涡旋至均匀。在室温下孵育溶液30分钟。然后，将反应液用1X稳定化溶液按1:40稀释（例如，对于50次检测，将125 µL DCF-DiOxyQ/预处理试剂反应液加入到4.875 mL稳定化溶液中）。涡旋至均匀。避光保存。该溶液现在以DCFH形式稳定，可直接使用。当避光保存时，该溶液可在-20ºC下稳定保存长达一周。

注意：由于光诱导的自氧化作用，DCF-DiOxyQ原液以及所有后续的DCF-DiOxyQ和DCFH溶液都必须避光保存。

结果示例：

以下图表展示了典型的自由基ROS/RNS检测结果。荧光测量是在Molecular Devices的SpectraMax Gemini XS荧光光度计上进行的，使用485/538 nm滤光片组和530 nm截止滤光片。以下数据仅供参考，不应用于解释实际结果。