摘要：Nephrin（足蛋白）是一种在足细胞中表达的跨膜蛋白，足细胞是覆盖在肾小球基底膜外侧的脏层上皮细胞。这些细胞具有交错的足突，形成裂孔隔膜，调节血浆蛋白通过肾小球屏障的通过，因此发挥过滤功能。Nephrin基因突变、Nephrin产生异常以及足细胞功能异常均会

Nephrin（足蛋白）是一种在足细胞中表达的跨膜蛋白，足细胞是覆盖在肾小球基底膜外侧的脏层上皮细胞。这些细胞具有交错的足突，形成裂孔隔膜，调节血浆蛋白通过肾小球屏障的通过，因此发挥过滤功能。Nephrin基因突变、Nephrin产生异常以及足细胞功能异常均会导致蛋白尿，这种情况常见于影响肾小球的疾病，如肾病综合征和糖尿病。肾脏损伤可能伴随Nephrin释放和/或足细胞脱落进入尿液。动物和糖尿病患者的研究支持Nephrin尿是肾脏损伤和疾病中肾小球损伤的标志物，并且可能反映损伤的严重程度。检测尿液中的Nephrin可能有助于早期发现肾功能异常和/或评估肾脏对治疗干预的反应。

艾美捷Ethos Biosciences-人Nephrin ELISA试剂盒【#1035】使用人Nephrin（hNephrin）作为标准品，并采用针对人Nephrin N端的鼠单克隆抗体。这种抗体不会与人白蛋白发生交叉反应。人Nephrin ELISA是一种间接竞争性ELISA，结果以ug/ml hNephrin报告。检测板预先涂有hNephrin。将稀释的标准品和样本分别加入相应的孔中。加入抗hNephrin抗体，该抗体与固定相的Nephrin或流动相中的Nephrin结合，因此称为竞争性结合。然后洗去未结合的反应物，并与抗小鼠IgG HRP偶联物完成反应。偶联物与结合到固相抗原的抗体结合，用酶标记它。洗去后，加入显色底物。经过短暂孵育后，用酸终止反应。检测中的颜色强度与初始流动相中人Nephrin浓度的对数成反比。人Nephrin ELISA是一种用于测量人尿液样本中Nephrin的竞争性ELISA，仅供研究目的。

样本采集与储存：采集不含防腐剂的尿液样本。冷冻并储存于-60°C，最长可达2个月。检测前，让样本恢复至室温。解冻冷冻样本时不要加热。样本应混合均匀，并静置至少15分钟，以便颗粒沉降。

人Nephrin ELISA试剂盒组成：

- 1块人Nephrin检测板

- 2瓶EIA稀释液

- 1瓶人Nephrin标准品

- 1瓶抗人Nephrin小鼠单克隆抗体（抗体）

- 1瓶抗小鼠IgG HRP偶联物

- 1瓶TMB显色剂

- 1瓶酸性显色终止液

- 1份说明书

人Nephrin检测板已预先涂覆，可直接使用。试剂盒中的所有试剂均以即用型液体形式提供。

所需材料和设备（试剂盒中未包含）：

- 洗涤缓冲液：Ethos Biosciences EIA洗涤缓冲液效果良好。含0.05% Tween 20的PBS也可接受。水是不可接受的。

- 微量移液器和多通道移液器及吸头

- 稀释用试管（Microfuge试管效果良好）

- 需要配备450 nm吸光度测量功能的酶标仪

检测程序：

在运行检测前，让试剂恢复至室温。标准品和样本应轻轻混合，然后静置至少15分钟，以便颗粒沉降。这些说明旨在使用每个标准稀释度和每个样本稀释度的双孔完成检测。这种设计允许包含对照、标准曲线，并可分析多达40个样本。

标准品稀释：

此程序描述了制备七个（7）倍稀释标准品的过程：

1. 标记1-7号试管。

2. 向每支试管中加入120 µL EIA稀释液。

3. 将120 µL人Nephrin标准品加入1号试管。

4. 通过吸放液体5次混合内容物。

5. 将120 µL从1号试管转移到2号试管。

6. 按上述方法混合。

7. 继续操作至7号试管。

8. 现在1-7号试管中含有代表2.0-0.0313 µg/ml人Nephrin的稀释液。

文献参考：

1. Putaala, H et al: The murine nephrin gene is specificallyexpressed in kidney, brain and pancreas: inactivation of the geneleads to massive proteinuria and death. Hum Mol Genet 10:1-8,2001

2. Putaala, H. et al: Primary structure of mouse and rat nephrincDNA and structure and expression of the mouse gene. J Am SocNephrol 11:991-1001, 2000

3. Holtzman, LB et al: Nephrin localizes to the slit pore of theglomerular epithelial cell. Kidney Int 56:1481-1491, 1999

4. Routsalainen, V et al: Nephrin is specifically located at the slitdiaphragm of glomerular podocytes. Proc Natl Acad Sci USA96:7962-7967, 1999

5. Holthofer, H et al: Nephrin localizes at the podocyte filtrationarea and is characteristically spliced in the human kidney. Am JPathol 155:1681-1687, 1999

6. Kestila, M et al: Positionally cloned gene for novel glomerularprotein – nephrin – is mutated in congenital nephrotic syndrome.Mol Cell 1:575-582, 1998

来源：真的教育